Ceratonia siliqua L. YAPRAK EKSTRESİNİN VE ÇEŞİTLİ BİYOAKTİF BİLEŞİKLERİNİN İNSAN AKCİĞER KANSERİ (A549) HÜCRE HATTINDA OTOFAJİ VE APOPTOZ ÜZERİNDEN ANTİTÜMÖR AKTİVİTELERİNİN ARAŞTIRILMASI

ÇalışmamızdaA549 küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücrehattında Ceratoniasiliqua L (C.siliqua)’ dan elde edilen yaprakekstreleri ve ekstrelerin içeriğinde bulunan gallik asit, epikateşin-3-gallat,  epigallokateşin-3-gallat ve klorojenik asitbileşiklerinin apoptoz ve otofaji sinyal iletim yollarında antitümoral bir ajanolarak kullanabilme potansiyelleri ve moleküler mekanizmalarının araştırılmasıhedeflenmiştir. Bu amaçla C. siliqua yaprak ekstrelerinin fenolik içerikleri LC/MS/MS ile,çalışmada kullanılacakekstre ve fenolik bileşiklerin hücre proliferasyonu üzerindeki etkileri ise MTTanalizi ile belirlendi. Apoptoz veotofaji ile ilişkili genlerin mRNA transkripsiyon ve protein ekspresyondüzeyleri sırasıyla RT-qPCR (Bax, Bcl-2ve kaspaz 3) ve western blot (Bax, Bcl-2, Beklin 1, Atg 5 ve LC3) analizleri ile belirlendi. Sonuç olarak, C. siliqua yaprak ekstrelerinin A549hücrelerinin canlılıklarını doza ve süreye bağlı olarak azalttıkları, fenolikbileşiklerin ise A549 hücrelerinin canlılıkları üzerinde inhibe edici etkiyesahip olmadıkları belirlendi. RT-qPCRve western blot analizlerinden elde edilen sonuçlar, C. siliqua yaprak ekstrelerinin proapoptotik Bax ve kaspaz 3 düzeyini artırarak, antiapoptotik Bcl-2düzeyini ise azaltarak A549 hücrelerinde apoptotik hücre ölümünü uyardıklarını göstermiştir. Diğertaraftan,  C. siliqua yaprak ekstrelerinin otofaji ile ilgili Beklin 1 ve Atg5 düzeylerini azaltıp, buna karşın otofaji belirteci olan LC3-II düzeyiniartırarak otofaji yolağını uyardığı belirlenmiştir. Bununla birlikte, otofajiile apoptoz arasındaki moleküler bağlantıları ortaya çıkarmak için otofaji vegenel kaspaz inhibitörleri kullanılarak yapılan çalışmalardan elde edilenveriler, A549 hücrelerinde otofajive apoptoz arasındaki ilişkinin açığa çıkarılabilmesinde yetersiz kalmıştır.In our study, the possible antitumoral agentsand molecular mechanisms of Ceratonia siliqua L. leafextracts and the components in these extracts which are gallic acid, epicatechin-3-gallate,epigallocatechin-3-gallate and chlorogenic acid were investigated in apoptosisand autophagy signal transduction pathways on A549 non small cell lung cancer cells. For this purpose,the phenolic contents of the leaf extracts of C. siliqua were determined by LC/MS/MS, and the effects oncell proliferation of extracts and phenolic compounds that will be used in thestudy were determined by MTT assay. mRNA transcriptionand protein expression levels of apoptosis- and autophagy-related genes weredetermined by RT-qPCR (Bax, Bcl-2 ve caspase 3) and western blot (Bax, Bcl-2, Beclin 1, Atg 5 ve LC3) analysis, respectively. As a result, it was determined that C. siliqua leaf extracts reduced theviability of A549 cells depending on the dose and duration, while the phenolic compoundshad no inhibitory effect on the viability of A549 cells. Results from RT-qPCRand western analysis showed that C.siliqua leaf extracts stimulated apoptotic cell death in A549 cells byincreasing proapoptotic Bax and caspase-levels and by decreasing antiapoptoticBcl-2 levels. On the other hand, it was determined that C. siliqua leaf extracts reduced the levels of Beclin 1 and Atg5 which are related to autophagy, but stimulated the autophagic pathway byincreasing the level of an autophagic marker LC3-II. However, the data obtainedfrom our studies using autophagy and general caspase inhibitors to elucidatethe molecular link between autophagy and apoptosis are insufficient toelucidate the relationship between autophagy and apoptosis in A549 cells.