Eksfoliatif toksin genlerinin klonlanması ve toksin ekstraktının psoriasis oluşturulmuş farelerdeki etkisinin araştırılması

Psoriasis ülkeden ülkeye oranlar değişmekle birlikte görülme sıklığı %1-11 arasında değişen kronik bir hastalıktır. Dünyada yaklaşık 125 milyon insanın bu hastalıktan etkilendiği düşünülmektedir. Deri bulguları özellikle epidermis kalınlaşması ve keratinizasyon yalnızca fiziki değil psişik ve sosyal sorunlar da oluşturabilmektedir. Eksfoliatif toksin özellikle Staphylococcus bakterileri tarafından sentezlenen ve desmoglein üzerine etkili bir proteazdır. Desmoglein epidermal hücreleri birbirlerine bağlar ve yıkımlarıyla epidermal tabakada kopukluklar oluşur. Bu çalışmanın amacı Staphylococcus suşları tarafından sentezlenen eksfoliatif toksin A ve eksfoliatif toksin D’nin rekombinant olarak sentezlenmesi ve psoriasis oluşturulmuş farelerdeki etkisinin gözlenmesiydi. Materyal ve Metod. Kolleksiyonumuzdaki 415 MRSA suşunda eta, etb ve etd genlerinin varlığı PCR ile araştırılmış ve eta ve etd pozitif suşlar gen klonlanması için kullanılmıştır. PCR ile histidin kuyruğu ve restriksiyon enzim yeri eklenen primerler kullanılarak çoğaltılan genler pUC19 plazmidine klonlanmış ve E. coli DH10B suşuna aktarılmıştır. Rekombinant toksin proteinleri NiNTA kolonlarıyla saflaştırılmış ve %2 ve %5’lik dozlarda aldara uygulanarak psoriasis geliştirilmiş farelere uygulanmıştır. Bulgular. Aldara (imikimod) uygulanarak psoriasis geliştirilen farelerde keratinizasyon ve epiderm kalınlaşması görülmüş, eksfoliatif toksin uygulamasıyla keratinizasyon ve kalınlaşmada patolojik analizlerde azalma gözlenmiştir. Lezyonlardaki iyileşmenin %5 toksin dozu uygulanan farelerde daha belirgin olduğu saptanmıştır. Sonuç. Proje hipotezinde öngörülen psoriatik lezyonlarda epidermal tabaka ayrılması uygulanan doz ve yöntemle elde edilememiş ancak keratinizasyon ve epidermal tabaka kalınlaşmasında azalma gözlenmiştir. Eksfoliatif toksinin psoriasis olgularında kullanılabilirliğinin ileri saflaştırma, yüksek doz uygulamaları ve uzun süreli tedavi ile derinlemesine araştırılması uygulama potansiyelinin değerlendirilebilmesi için fayda sağlayabilir.Psoriasis is a chronic disease with a frequency ranging from 1 to 14% in the world. Approximately 125 million people worldwide are thought to be affected by this disease. Skin findings, especially epidermal thickening and keratinization in addition to physical problems, cause psychicologic and social problems. Exfoliative toxin is a protease that is synthesized especially by Staphylococcus bacteria and selectively targets desmoglein protein. Desmoglein binds the epidermal cells together and their destruction cause loss of keratinocytes, the cell‐cell adhesion, induces peeling of the skin. The aim of this study was to recombinantly synthesize exfoliative toxin A and exfoliative toxin D and to observe their effect on psoriasis-generated mice. Material and Method. The presence of the eta, etb, and etd genes in 415 MRSA strains from our collection was investigated by PCR and eta and etd positive strains were used for gene cloning. Theese genes were amplified using primers with histidine tail and restriction enzyme site by PCR and amplicons were cloned in pUC19 plasmid and transferred to E. coli strain DH10B by transformation. Recombinant toxin proteins were purified with NiNTA columns and applied to psoriasis-developed mice at 2% and 5% doses. Results. Keratinization and epidermis thickening were observed in mice treated with Aldara (imiquimod). The mice with psoriasis application of recombinant exfoliative toxin decreased keratinization and epidermal thickening. It was determined that the healing of lesions was more prominent in 5% toxin applied mice. Conclusion. Separation epidermal layer in the psoriatic lesions by application of recombinant exfoliative toxin was the main hypothesis of this project. However, our hypothesis was not confirmed with the doses and methods applied. But a decrease in keratinization and epidermal layer thickening was observed among toxin treated mice compared to non-treated ones. In-depth investigation of the efficacy of exfoliative toxin in psoriasis cases with advanced purification, high-dose treatments and long-term therapy may be helpful in assessing the potential for application of exfoliative toxin