Meme kanseri hücre hatlarında EGFR (epidermal büyüme faktörü reseptörü) gen ekspresyonunun plazmid-bazlı mikrorna-7/kitozan kompleksleri ile baskılanmasına ilişkin in vitro çalışmalar

Meme Kanseri Hücre Hatlarında EGFR (Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü) GenEkspresyonunun Plazmid-bazlı MikroRNA-7/Kitozan Kompleksleri ile Baskılanmasınaİlişkin İn Vitro ÇalışmalarÖğrencinin Adı : Pelin BULUTDanışmanı : Dr. Öğr. Üyesi Suna ÖZBAŞ TURANAnabilim Dalı: Farmasötik Biyoteknoloji Anabilim Dalı1. ÖZETAmaç: Pek çok miRNA’nın etkinlik gösterdiği meme kanserinde, miRNA-7, tümör supresörolarak kabul edilen önemli bir miRNA grubu olarak tanımlanmıştır. Ancak, miRNA’larınhedef hücrelere herhangi bir biyodegresyona uğramadan transferinde bazı zorluklarmevcuttur. Bu çalışmadaki amaç, doğal bir biyopolimer olan ve çeşitli araştırmalar sonucundaetkinliği yüksek gen taşıyıcı sistem olarak kabul edilen kitozan kullanılarak hazırlananmiRNA-7/kitozan komplekslerinin MCF-7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücre hatlarındaEGFR gen ekspresyonunun baskılanmasına ilişkin etkisini araştırmaktır.Gereç ve Yöntem: MDA-MB-231 ve MCF-7 hücre hatlarında EGFR gen ekspresyonunubaskılayabilecek miRNA-7/kitozan kompleksleri basit kompleksasyon yöntemiylehazırlanarak stabilite çalışmaları, partikül boyutu, zeta potansiyeli gibi karakterizasyonlarıyapıldı. Komplekslerin kanser hücre hatlarına transfeksiyonu sonrası hücre proliferasyontestleri yapıldı.Bulgular: miRNA-7’nin %0,25’lik kitozan çözeltisi kullanılarak farklı oranlarda hazırlananformülasyonlarla tam kompleks oluşumu ve komplekslerin MDA-MB-231 ve MCF-7 memekanseri hücre hatlarına in vitro transfeksiyonu sağlanmıştır.Sonuçlar: Çalışma sonucunda komplekslerin hücrelere stabil olarak taşındığı, kanserhücrelerinin yayılımını azalttığı, EGFR gen ekspresyonunun baskılandığı ve kitozankomplekslerinin miRNA için etkinliği yüksek ve güvenilir bir gen taşıyıcı sistem olduğugösterilmiştir.--------------------In Vitro Studies on Impression of EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) GeneExpression with Plasmid-based MicroRNA-7 / Chitosan Complexes in Breast CancerCell LinesStudent’s Name : Pelin BULUTSupervisor : Dr. Öğr. Üyesi Suna ÖZBAŞ TURANDepartment: Department of Pharmaceutical Biotechnology2. ABSTRACTObjective: In a large number of miRNA-driven breast cancers, the miR-7 family has beenidentified as an important miRNA group with tumor suppressor activity. However, there aresome difficulties in transferring miRNAs to target cells without any biodegression. Purposeof this study is to investigate the effect of miRNA-7/chitosan complexes prepared by usingchitosan on MDA-MB-231 and MCF-7 breast cancer cell lines in vitro on EGFR geneexpression suppression.Material and Method: MiRNA-7 / chitosan complexes capable of suppressing EGFR geneexpression in MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines were prepared by simple complexationmethod and their characterizations such as stability studies, zeta potential particle size studieswere performed. After transfection of complexes to cancer cell lines, cell proliferation testswere performed.Result: miRNA-7 using 0.25% chitosan solution in different ratios prepared with the fullcomplex formation of the complex and MDA-MB-231 and MCF-7 in vitro transfection ofbreast cancer cell lines were provided.Conclusion: The result of the study, it has been proven that complexes are transported to cellsstably, decrease the invasiveness of cancer cells, repress EGFR gene expression and chitosancomplexes are a safe and effective carrier system for miRNA