Vasküler endotelyal büyüme faktörü yüklü poli (laktik-ko-glikolik asit) mikrokürelerinin in vitro ve in vivo değerlendirilmesi

ÖZETVasküler Endotelyal Büyüme Faktörü Yüklü Poli(Laktik-Ko-Glikolik Asit) Mikrokürelerinin In Vitro Ve In Vivo DeğerlendirilmesiVEGF, endotelyal hücrelerin proliferasyonu, migrasyonu, farklılaşması ve sağkalımını düzenlemesi nedeniyle vasküler gelişim için çok önemli bir rol oynayan polipeptit yapıda bir büyüme faktörüdür. VEGF, dendritler ve “Schwann” hücre sağkalımı ve proliferasyonu üzerine direkt olumlu etkileri ile periferal sinir sisteminin rejenerasyonunda da önemli bir rol oynamakta, ayrıca rejenerasyonu anjiyogenez üzerinden indirekt olarak da artırmaktadır. Bu çalışmada VEGF yüklü PLGA mikrokürelerinden VEGF’in kontrollü salımının sağlanması ve sıçanlarda sinir greft prefabrikasyonunun gerçekleştirilmesi amaçlanmıştır. In vitro çalışmalar kapsamında VEGF içeren PLGA mikrokürelerinin hazırlanmasının ardından mikrokürelerin boyut ve SEM analizleri yapılmış, in vitro salım özellikleri ELISA ile belirlenmiştir. Formülasyonların sitotoksisitesi ve VEGF’in proliferasyon etkisini değerlendirmek için MTT testi kullanılmıştır. In vitro çalışmalar sonucunda optimum formülasyon belirlendikten sonra in vivo değerlendirme aşamasına geçilmiştir. In vivo çalışmalar kapsamında ise sıçanlarda sinir greft prefabrikasyonu gerçekleştirmek amacıyla, siyatik sinirin trifikasyonunun distalinde tibial ve peroneal sinirlerde epinöral pencere açılarak, üç ayrı deney grubunda çalışılmıştır. VEGF’in ELISA ile kanda kantitatif analizi ve yürüme yolu analizi yapılmıştır. Ven greftlerinin histolojik değerlendirmeleri ışık mikroskobu ve TEM analizi ile gerçekleştirilmiştir. Işık mikroskobunda incelenen kesitlerde juguler ven içerisinde miyelinli sinir fibrillerin sayısı ve ortalama çapları belirlenmiş, TEM analizi ile akson ve miyelin kılıfının yapısı incelenmiştir. Sonuç olarak, VEGF yüklü mikroküreler hazırlanmış ve otolog ven kullanılarak sinir greft prefabrikasyonu gerçekleştirilmiştir.Anahtar kelimeler: Kontrollü salım, mikroküre, PLGA, sinir greft prefabrikasyonu, VEGFSUMMARYIn Vitro and in Vivo Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factor Loaded Poly (Lactic-co-Glycolic Acid) MicrospheresVEGF, a polypeptide growth factor, is a critical organiser of vascular development due to its ability to regulate proliferation, migration, specialization and survival of endothelial cells. VEGF acts a crucial role on peripheral nerve regeneration by direct effects on axonal outgrowth, neurons, dendrites and survival and proliferation of “Schwann” cells and also increases regeneration by angiogenesis. The aim of this study was to control the release of VEGF from VEGF loaded PLGA microspheres and produce nerve graft prefabrication on rats. In in vitro studies, after the preparation of VEGF loaded PLGA microspheres, the size and SEM study were done and also in vitro release properties were conducted with ELISA. For evaluation of the cytotoxicity of the formulations and proliferation effect of VEGF, MTT test was performed. According to the in vitro studies, optimum formulation was determined and in vivo evaluation stage was conducted. In in vivo studies, epineural window was opened at the distal side of the siatical nerve trification and three separate groups were studied in order to fulfil nerve graft prefabrication. Quantitative analysis of VEGF in blood using ELISA and walking track for rats were done. Histological evaluation of vein grafts were performed with light microscope and TEM analysis. In specimens examined with light microscope, the number and the average diameter of nerve fibers with myelin were determined. The structure of axon and myelin sheath were examined by TEM analysis. In conclusion VEGF loaded microspheres were prepared and nerve graft prefabrication was produced by using autologous vein. Key words: Controlled release, microsphere, nerve graft prefabrication, PLGA, VEG