Over Tümörlerinde Gip Mutasyonlarının Hibritleme ve SSCP Yöntemiyle İncelenmesi

ÖZETBu çalışmada sinyal iletim sisteminde önemli rolü olan G-proteinlerinin a-altbirimlerindeki gsp ve gip mutasyonlarının over ve paratiroid tümörlerindeki olası rolü araştırıldı. a-altbirimlerindeki olası mutasyonları incelemek için taze doku ve parafine gömülü doku örneklerinden DNA izole edildi. Elde edilen DNA'dan Gas proteininin 201, Gai2 proteininin 179 ve 205 numaralı kodonları içeren bölgeler, özgül primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltıldı.PZR ürünlerindeki mutasyonlar SSCP (Tek Sarmal Konformasyon Polimorfizmi) yöntemiyle incelendi. Örnekler, gliserollü MDE ve denatüre edici olmayan poliakrilamid jellerinde elektroforeze tabi tutulduktan sonra gümüş nitratla boyandı. Ayrıca, nokta-emdirme düzeneği kullanılarak naylon filtreye emdirilen PZR ürünleri radyoaktif işaretlenmiş allel seçici problarla hibritleştirildi.SSCP analizi sonuçları ile uyumlu şekilde, hiçbir örnekte gsp ve gip mutasyonlarına rastlanmadı.SUMMARYThe overexpression of G-proteins a-subunits as a result of mutations has been associated with growth and neoplasia. In this study, gsp and gip mutations in 12 ovarian tumors and 6 parathyroid tumors were studied. DNA was isolated from both fresh tissue and paraffin-embedded tissue and regions encompassing codon 201 of Gsa and codons 179 and 205 of Gi2a were amplified using the polymerase chain reaction. To identify the role of gsp and gip mutations in these neoplasias, DNA samples were denatured and subjected to SSCP analysis in non-denaturing polyacrylamide gels and MDE gels containing 6% glycerol. Comparison of the mobility of the variously folded single-strand conformers of tumor and normal DNA revealed no differences in these samples. The same DNA samples were dot blotted onto nylon membranes and hybridized with radiolabeled allele specific oligonucleotide probes. Consistent with SSCP analysis, no gsp and gip mutations were detected in either of the tumor samples