Evaluación de dos protocolos de congelación de espermatozoides epididimarios en la especie Canis Lupus familiaris

Esta investigación evaluó dos protocolos de congelación de espermatozoides epididimarios caninos sobre la criosupervivencia celular, uno convencional (CC) que usa vapores de nitrógeno líquido (NL2) estático, y otro ultrarrápido (CU) que sumerge directamente gotas de esperma (30 L) en NL2. Para este propósito, se usaron 60 epidídimos de 30 perros adultos orquiectomizados. Las muestras fueron recuperadas por flujo retrógrado y entonces se conformó 30 agrupaciones (3 muestras epididimarias / agrupación). Cada agrupación fue dividida en 2 alícuotas que fueron criopreservadas por CC y CU, usando glicerol (5%, v/v) y sacarosa (250 mM), respectivamente, adicionados al diluyente TCG-YH (tris, ácido cítrico, glucosa + 20% yema de huevo). Los resultados mostraron que el protocolo CU produjo menores porcentajes (P < 0,05) de motilidad total y progresiva e integridad de membrana acrosomal que el protocolo CC. Sin embargo, las variables cinéticas (velocidades curvilínea y rectilínea, rectitud, linealidad, oscilación, amplitud lateral de la cabeza y frecuencia de batida de flagelo) e integridad de la membrana plasmática (viabilidad) no difirieron (P > 0,05) entre ambos métodos de congelación. Eficientemente, el protocolo de congelación CU no varió (P > 0,05) el largo, ancho, área y perímetro de la cabeza espermática con respecto a los valores sin congelar. En conclusión, el protocolo CU afecta la motilidad en comparación con el protocolo CC, no obstante, el logro de los niveles de cinética y viabilidad junto con el mantenimiento de las dimensiones morfométricas de la cabeza abre buenas expectativas para su uso en la criopreservación eficiente de espermatozoides epididimarios de caninos domésticos y silvestres.This study was aimed to assess two canine epididymal sperm freezing protocols on cryosurvival, one conventional (CF) that uses static liquid nitrogen (LN2) vapors, and another ultra-rapid (UF) that directly plunges drops (30uL) of sperm in LN2. For this purpose, sixty epididymides from 30 orchiectomized adult dogs were used. The sperm samples were retrieved by retrograde flushing and then thirty pools were conformed (3 epididymal samples/pool). Each pool was divided into 2 aliquots that were cryopreserved with both CF and UF protocols using either 5% glycerol and 250 mM sucrose, respectively, added to the TCG-EY extender (tris, citric acid, glucose plus 20% egg yolk). The results showed that the UF protocol produced lower motility (total and progressive) and acrosomal membrane integrity (P < 0.05) than the CF protocol. However, the kinetic variables (curvilinear and rectilinear velocities, straightness, linearity, oscillation, the amplitude of lateral head displacement and beat-cross frequency) and plasma membrane integrity (viability) did not differ (P > 0.05) between both cryopreserving protocols. Efficiently, the UF protocol did not vary (P > 0.05) the length, width, area, and perimeter of the sperm head with respect to the non-frozen values. In conclusion, the UF protocol affects motility compared to the CF protocol. Despite this, the achievement of kinetics and viability levels in conjunction with the invariance of the morphometric head dimensions opens up good expectations for its use in the efficient cryopreservation of epididymal sperm from domestic and non-domestic canines.Médico Veterinario ZootecnistaCuenc