Etablierung eines Kollagen-Kontraktionsassay zur Untersuchung der Wirkung von Imatinib, Nilotinib und Dasatanib auf die Kontraktionskraft von Rattenlungenfibroblasten

Die Lungentransplantation ist die einzige etablierte kurative Therapie für Patienten mit nicht malignen Lungenerkrankungen im Endstadium. Eine häufige Komplikation ist die Entstehung einer Bronchiolitis obliterans, bei der es zu narbig-fibrotischen Umbauvorgängen insbesondere der kleinen Atemwege und des Lungeninterstitiums kommt. Daher stehen Rezeptor-Tyrosin-Kinase-Inhibitoren (=RTK-I) als antifibrotische Wirkstoffe im Fokus der Forschung. In der vorliegenden Arbeit soll der Einfluss der RTK-I Imatininb, Nilotinib und Dasatanib auf die Kontraktionskraft von Rattenlungenfibroblasten untersucht werden. Dazu wurde zunächst ein Protokoll zur Kollagenherstellung und ein Kollagen-Kontraktionsassay (=CGC) mit entsprechenden Positiv- und Negativkontrollen etabliert. Im CGC wurden die Fibroblasten mit Imatinib (100µM; 20µM), Nilotinib (40µM; 20µM) und Dasatanib (10µM; 5µM; 2,5µM; 1µM; 0,5µM und 0,1µM) inkubiert. Nach 24h wurde die Fläche und damit das Kontraktionsausmaß bestimmt und mit den Positiv- und Negativkontrollen verglichen. Bei Imatinib kam es bei beiden Konzentrationen zu einer Kontraktion. In der Vitalitätsfärbung mit Dapi und Calcein sahen wir allerdings nahezu keine vitalen Zellen. Der zytotoxische Effekt steht bei diesen Konzentrationen im Vordergrund. Bei Nilotinib sahen wir ein ähnliches Ergebnis. Die Zellen waren hier noch vital – die fehlende Kontraktionshemmung liegt möglicherweise in einer zu niedrigen Konzentration von Nilotinib. Unter Dasatanib beobachteten wir eine dosisanhängige Kontraktionshemmung. Die maximale Hemmung erreichten wir bei 10µM (57,9% ± 9,8; positiv: 21,8% ± 4,9; 43,0% ±11,2). Die mittlere Hemmkonzentration EC50 lag bei 2,4µM. Die Zellen waren bei allen Konzentrationen ausreichend vital. Dasatanib zeigte in unserer Studie in Anhängigkeit der Dosierung die stärkste Kontraktionshemmung. In der Anwendung ist dieses Medikament gut steuerbar und hat, wie aus der Literatur bekannt, eine positive Wirkung auf senescente Zellen, die unter Dasatanib abgetötet werden (hier nicht untersucht). Demnach könnte diesem Medikament eine wichtige Bedeutung in der Behandlung fibrotischer Erkrankungen, bzw. in unserem Fall, der Bronchiolitis obliterans zukommen