Análise de polimorfismos em genes que codificam receptores de estrógeno na fisiopatologia da insuficiência do tendão tibial posterior

Orientadora: Professora Dra. Maria Cristina Leme Godoy dos SantosTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa : Curitiba, 26/02/2019Inclui referências: p. 58-71Resumo: O estrógeno desempenha um papel fundamental no desenvolvimento e integridade do sistema músculo-esquelético feminino e masculino, influenciando inclusive disfunções do tendão tibial posterior (TTP). Alguns pacientes apresentam tedinopatia do TTP sem causa clinicamente evidente, sugerindo que fatores genéticos podem influenciar nessa disfunção. O presente estudo investigou a associação entre polimorfismos (SNP) em de receptores de estrógenos e a tendinopatia de TTP. Foram analisados os SNPs Alul (rs4986938 + 1730 G > A) e RsaI (rs1256049 + 1452 G > A) do receptor de estrógeno beta (RE ) separadamente e em combinação haplotípica, e os SNPs Pvull (rs 2234693 + 397 T > C) e Xbal (rs 9340799 + 351 A > G) do receptor de estrógeno alfa (RE ) em combinações haplotípica. Meta-análise foi realizada a fim de esclarecer o papel dos SNPs em RE na fisiopatologia do sistema musculoesquelético. Um total de 400 participantes foram recrutados para análise dos SNPs AluI e RsaI, incluindo homens, mulheres no climatério (com diagnóstico clínico e laboratorial de menopausa) e mulheres sem climatério. Os participantes foram divididos em grupo amostra com diagnóstico clínico e anatomopatológico de tendinopatia do TTP e grupo controle com TTP íntegro na ressonância magnética. Células epiteliais da mucosa bucal foram coletadas com bochecho de glicose 3% e tiveram seu DNA extraído com acetato de amônio. Para amplificação e digestão das amostras, utilizou-se as técnicas de reação de PCR (Polimerase Chain Reaction) e RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) e os genótipos foram analisados através de eletroforese em géis de agarose. Para a análise haplotípica do RE , foram utilizados dados de projeto prévio de pesquisa realizado com 200 mulheres no climatério. Para a meta-análise, após a revisão sistemática foram selecionados 6 artigos que analisaram os SNPs AluI e RsaI em desordens musculoesqueléticas. Os resultados confirmam a associação do SNP AluI com a tendinopatia do TTP. Houve diferenças significativas nas frequências dos alelos entre os grupos teste e controle de homens e mulheres na pós-menopausa (p = 0,0016 e p = 0,0001), com o genótipo A/A emergindo como um efeito de risco. Comparando mulheres na pós-menopausa versus mulheres na pré-menopausa e adicionando homens, a análise mostrou diferenças significativas na distribuição alélica (p = 0,0450), sendo que o alelo A em mulheres na pós-menopausa pode ser considerado um fator de risco. O polimorfismo RsaI não apresentou diferença significativa entre os grupos estudados. A análise de haplótipo do RE , mostrou que o haplótipo G-A apresenta um efeito protetor (p ? 0,0025). Já para o haplótipo do RE não houve diferenças estatisticamente significativas para as frequências nos grupos estudados. No estudo da meta-análise, foi encontrada associação significativa de desordens musculoesqueléticas com o genótipo recessivo (A/A) e alelo recessivo (A) do SNP AluI, corroborando com o resultado de nossa pesquisa. Em conclusão, SNPs em RE influencia a tendinopatia do TTP e o SNP AluI pode ser considerado um marcador genético de interesse na fisiopatologia dos tendões. Palavras-chave: Tendinopatia. Receptor de estrógeno beta. Polimorfismos genéticos. Fisiopatologia. Tendão tibial posterior.Abstract: Estrogen plays a key role in the development and integrity of the female and male musculoskeletal system, influencing including dysfunctions of the posterior tibial tendon (PTT). Some patients present PTT tedinopathy with no clinically evident cause, suggesting that genetic factors may influence this dysfunction. The present study investigated the association between polymorphisms (SNP) in estrogen receptors and PTT tendinopathy. Alul SNPs (rs4986938 + 1730 G> A) and RsaI (rs1256049 + 1452 G > A) of the estrogen beta receptor (RE ) were analyzed separately and in haplotype combination, and the Pvull SNPs rs 2234693 + 397 T > C) and Xbal (rs 9340799 + 351 A > G) of the estrogen receptor alpha (RE ) in haplotypic combinations. Meta-analysis was performed to clarify the role of SNPs in RE in the pathophysiology of the musculoskeletal system. A total of 400 participants were recruited for analysis of AluI and RsaI SNPs, including men, women in climacteric (with clinical and laboratory diagnosis of menopause) and women without climacteric. The participants were divided into a sample group with clinical and anatomopathological diagnosis of PTT tendinopathy and control group with PTT intact on magnetic resonance imaging. Epithelial cells of the buccal mucosa were collected with 3% glucose mouthwash and had their DNA extracted with ammonium acetate. For amplification and digestion of the samples, PCR (Polymerase Chain Reaction) and RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) techniques were used and the genotypes were analyzed by electrophoresis on agarose gels. For the haplotypic analysis of the ER, we used data from a previous research project carried out with 200 women in the climacteric period. For the meta-analysis, after the systematic review, 6 articles were selected that analyzed the AluI and RsaI SNPs in musculoskeletal disorders. The results confirm the association of AluI SNP with PTT tendinopathy. There were significant differences in allele frequencies between the test and control groups of postmenopausal men and women (p = 0.0016 and p = 0.0001), with the A/A genotype emerging as a risk effect. Comparing postmenopausal women versus premenopausal women and adding men, the analysis showed significant differences in allelic distribution (p = 0.0450), and the A allele in postmenopausal women may be considered a risk factor. The RsaI polymorphism did not present a significant difference between the groups studied. Haplotype analysis of RE showed that the G-A haplotype had a protective effect (p ? 0.0025). For the RE haplotype, there were no statistically significant differences for the frequencies in the studied groups. In the meta-analysis study, we found a significant association of musculoskeletal disorders with recessive (A/A) and recessive allele (A) of the AluI SNP, corroborating the results of our study. In conclusion, SNPs in ER influences PTT tendinopathy and AluI SNP can be considered a genetic marker of interest in the pathophysiology of tendons. Keywords: Tendinopathy. Beta estrogen receptor. Genetic polymorphisms. Pathophysiology. Posterior tibial tendon