Analysis of neonicotinoid residues in foraged pollen and tissues of bee species Africanized Apis mellifera and Tetragonisca angustula Latreille (1811)

As abelhas têm um papel muito importante na sustentação das florestas e da produção agrícola, onde através da polinização mantêm a biodiversidade e aumentam o rendimento de sementes e frutas. No entanto, nos últimos anos a população das abelhas está em declínio, em parte, devido aos efeitos de agrotóxicos, principalmente os neonicotinóides. No Brasil tem se tornado cada vez mais comuns episódios de mortalidade de abelhas e abandono de colmeias como consequência do uso extensivo de agrotóxicos. Apesar disso, existem poucos estudos sobre os efeitos dessas substâncias nas espécies nativas e híbridas. Assim, o presente estudo teve como finalidade desenvolver um método de extração QuEChERS miniaturizado seguido da cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (UPLC-MS/MS), para a determinação dos neonicotinóides imidacloprida e tiametoxam no pólen forrageado e nos tecidos das abelhas africanizadas (Apis mellifera L.) e Tetragonisca angustula Latreille (1811). Este método permitiu estimar resíduos dos agrotóxicos em níveis de nanograma/grama (ng g-1), usando menores quantidades de amostra e reagentes em comparação com os métodos tradicionais. Dessa forma, foram empregadas 50 vezes menos abelhas africanizadas, 500 vezes menos T. angustula e 150 vezes menos pólen como amostras. Em relação aos reagentes, foram usados 15 vezes menos sais e solvente. Obtiveram-se recuperações médias entre 64,5 e 105,5 %, com boa repetibilidade (RSD <= 20 %), LOD e LOQ de 0,7 e 3 ng g-1 para ambos os inseticidas. Utilizando o método proposto, foram analisadas abelhas melíferas africanizadas de colmeias localizadas no estado de São Paulo e amostras de pólen e abelhas T. angustula de meliponários situados no município de Bom Repouso (Minas Gerais). Os neonicotinóides foram detectados em concentrações entre 7,0 e 27,0 ng g-1, obtendo-se a maior concentração para o tiametoxam em tecidos de Apis mellifera L. A metodologia desenvolvida mostrou versatilidade para a extração de neonicotinóides em tecidos de abelhas de diferentes espécies e matrizes apícolas, deste modo poderá ser usado como um método analítico que segue os princípios da química verde, para analisar neonicotinóides em níveis de resíduo em pequenas quantidades de amostras apícolas, consequentemente economizando produtos químicos e gerando poucos resíduos.Bees have a very important role in sustaining forests and agricultural production, as they maintain biodiversity and increase the yield of seeds and fruits through pollination. Nevertheless, in recent years the bee population has been declining, in part, because of the effects of pesticides, especially neonicotinoids. In Brazil, episodes of bee mortality and abandonment of hives have become increasingly common, as a consequence of the extensive use of pesticides. Despite this, there are few studies on the effects of these substances on native and hybrid species. Thus, the present study aimed to develop a miniaturized QuEChERS extraction method followed by ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) for the determination of the neonicotinoids imidacloprid and thiamethoxam in the foraged pollen and tissues from Africanized honeybee (Apis mellifera L.) and stingless bee Tetragonisca angustula Latreille (1811). This method allowed the estimation of pesticide residues at nanogram/gram (ng g-1) levels, using smaller quantities of sample and reagent compared to traditional methods. In this way, 50 times fewer Africanized honeybees, 500 times fewer T. angustula, and 150 times less pollen were employed as samples. Regarding reagents, 15 times less salts and solvent were used. Average recoveries ranging from 64.5 to 105.5 % were obtained, with good repeatability (RSD <= 20 %), LOD and LOQ of 0.7 and 3 ng g-1 for both insecticides. Using the proposed approach, Africanized honeybees from hives located at São Paulo state and pollen\'s samples and T. angustula bees from meliponaries located in the city of Bom Repouso (Minas Gerais) were analyzed. Neonicotinoids were detected in concentrations between 7.0 to 27.0 ng g-1, obtaining the highest concentration for thiamethoxam in tissues of Apis mellifera L. The developed methodology showed versatility for the extraction of neonicotinoids in tissues of different species of bees and beekeeping matrices, therefore it can be used as an analytical method that follows the green chemistry\'s principles to analyze neonicotinoids at trace levels in small quantities of beekeeping samples, consequently saving chemicals and reducing waste