Development of voltammetric methods for detection of cholesterol and its prekursor lathosterol

Cholesterol je nezastupitelný sterol vyskytující se v živočišných buňkách, lathosterol je jedním z jeho prekursorů. Prvním cílem této práce je vývoj metody stanovení cholesterolu po extrakci kapalina-kapalina z mléčných matric metodou diferenční pulzní voltametrie na elektrodě z borem dopovaného diamantu v prostředí kyseliny chloristé v acetonitrilu, kde cholesterol poskytuje ireverzibilní odezvu v anodické oblasti při potenciálu mezi +1300 a +1600 mV v závislosti na obsahu vody. Byla ověřena i možnost spektrofotometrického stanovení pomocí Abell-Kendallovy metody. Druhým cílem je studium voltametrického chování lathosterolu na elektrodách z borem dopovaného diamantu a skelného uhlíku pomocí metod cyklické voltametrie a diferenční pulzní voltametrie především v prostředí kyseliny chloristé, ale i chloristanu sodného, kde lathosterol poskytuje ireverzibilní anodickou odezvu s potenciálem okolo +1650 mV na elektrodě z borem dopovaného diamantu, resp. s potenciálem +1350 mV na elektrodě ze skelného uhlíku. Také byl zkoumán vliv dalších kyselin na odezvu lathosterolu - sírové, dusičné a fosforečné. Byl studován vliv obsahu vody v měřeném roztoku a vliv rychlosti polarizace na odezvu lathosterolu. Dále byla měřena koncentrační závislost lathosterolu metodou diferenční pulzní voltametrie po optimalizaci...Cholesterol is an irreplaceable sterol found in animal cells, lathosterol is one of its precursors. The first aim of this Thesis is to develop a method for determining cholesterol after liquid- liquid extraction from milk matrices by differential pulse voltammetry on a boron doped diamond electrode in the presence of perchloric acid in acetonitrile where cholesterol provides an irreversible anodic response at the potential between +1300 and +1600 mV depending on the water content. The second aim is a study of the voltammetric behavior of lathosterol on boron doped diamond and glassy carbon electrodes using cyclic voltammetry and differential pulse voltammetry mainly in perchloric acid but also sodium perchlorate where lathosterol provides an irreversible anodic response at the potential of about +1650 mV on the boron doped diamond electrode and at the potential of +1350 mV on a glassy carbon electrode. The effect of other acids - sulfuric, nitric and phosphoric - on the response of lathosterol was also investigated. The influence of the water content in the measured solution and the influence of the polarization rate on the response of lathosterol were studied. Furthermore, the calibration dependence of lathosterol was measured using differential pulse voltammetry after optimization of its...Department of Analytical ChemistryKatedra analytické chemiePřírodovědecká fakultaFaculty of Scienc