Membranes des mitochondries de cortex surrénal de boeuf. Isolement, purification et propriétés enzymatiques générales. Réactivité vis-à-vis de la désoxycorticostérone.

Adrenal cortex mitochondria contain a cytochrome P-450 involved in the mitochondrial steroid 11beta-hydroxylation and similar to the cytochrome P-450 found in the microsomes. The outer and inner membranes from adrenal cortex mitochondria were separated following centrifugation on a sucrose density gradient and differentiated on the basis of their morphology and of their enzyme distribution pattern. The enzymatic system concerned with the 11beta-hydroxylation is strictly confined to the inner membrane fraction. The absence of cytochrome P-450 from the outer membrane is a significant difference between the outer mitochondrial membrane and the microsomal membranes in adrenal cortex. The use of ferricyanide as a nonpenetrating electron acceptor has shown that the cytochrome P-450 involved in the 11beta-hydroxylation of deoxyorticosterone is located on the matrix side of the inner mitochondrial membrane.The binding of deoxycorticosterone and metyrapol, an inhibitor of steroid hydroxylation, to adrenal cortex mitochondria has been investigated. High-affinity binding sites (N = 0.5 nmol/mg of protein and Kd = 7.5 x 10-9 M) for metyrapol have only been found in the inner mitochondrial membrane in agreement with the localization of the mitochondrial cytochrome P-450 in the same membrane. The number of metyrapol binding sites in mitochondria is similar to the number of high-affinity sites found for steroids which are substrates of the 11beta-hydroxylase system. This number is about half the amount of mitochondrial cytochrome P-450 (1.1 nmol/mg of protein) supporting the occurence of two types of cytochrome P-450 in adrenal cortex mitochondria, one specific for the 11beta-hydroxlation, and another for the cholesterol side-chain cleavage.Les mitochondries du cortex surrénal contiennent un cytochrome P-450 impliqué dans la réaction de 11beta-hydroxylation des stéroides qui est semblable au cytochrome P-450 trouvé dans les microsomes. Les membranes externes et internes des mitochondries de cortex surrénal ont été séparées après centrifugation sur un gradient de densité de saccharose et différenciées sur la base de leur morphologie et de la distribution d'enzymes caractéristiques. Le système enzymatique de 11beta-hydroxylation est strictement confiné aux membranes internes. L'absence de cytochrome P-450 dans la membrane externe est une différence significative avec les microsomes du cortex surrénal. L'utilisation du ferricyanure comme accepteur d'électrons non pénétrant montre que le cytochrome P-450 impliqué dans la 11beta-hydroxylation de la désoxycorticostérone est situé du côté matriciel de la membrane interne mitochondriale.La fixation de la désoxycorticostérone et du métyrapol, un inhibiteur de l'hydroxylation des stéroïdes, a été mesurée sur les mitochondries de cortex surrénal. Des sites de forte affinité (N = 0,5 nmol/mg de protéine et de Kd = 7,5 x 10-9 M) pour le métyrapol ont été trouvés seulement dans la membrane interne mitochondriale et ceci est en accord avec la localisation du cytochrome mitochondrial P-450 dans la même membrane. Le nombre de sites de fixation du métyrapol est semblable au nombre de sites de haute affinité trouvés pour les stéroïdes qui sont des substrats de la 11beta-hydroxylase. Cette valeur est voisine de la moitié de la quantité du cytochrome mitochondrial P-450 (1,1 nmol/mg de protéine) supportant la présence de deux types de cytochrome P-450 dans des mitochondries de cortex surrénal, un pour la 11beta-hydroxlation et un autre pour la coupure de la chaîne latérale du cholestérol