Otimização da diagnose molecular de vírus, bactéria e fungo em cana-de-açúcar.

RESUMO: Visando à otimização da diagnose molecular de plântulas de cana-de-açúcar, tentou-se desenvolver iniciadores específicos para escaldadura e ferrugem alaranjada, assim como a comparação da PCR comum e a PCR em Tempo Real (PCR/TR) de maior resolução, importante para doenças com grande período de latência, como as causadas por: 1- Bactérias, (a) raquitismo-da-soqueira (Leifsonina xyli subsp. Xyli) e (b) escaldadura (Xanthomonas aibilineans); 2- Vírus, (a) amarelinho (Sugarcane Yellow Leaf Vírus); (b) mosaico (Sugarcane Mosaic Vírus) e (c) fijivirus (Fiji disease vírus); 3- fungo, (a) carvão (Sporisorium scitamineum) e (b) ferrugem alaranjada (Puccinia kuehnii). As plântulas foram obtidas do quarentenário do IAC. Os iniciadores da literatura para cana-de-açúcar detectaram especificamente o raquitismo, amarelinho, mosaico e fijivirus, enquanto os desenvolvidos para PCR/TR para as mesmas doenças, incluindo a escaldadura e ferrugem alaranjada, possibilitaram a detecção com maior diluição das amostras. Os iniciadores da ferrugem alaranjada, além de não detectarem a ferrugem marrom, também diferenciaram a ferrugem branca do milho. Os da escaldadura não foram específicos somente para o gênero Erwinia, enquanto que os da literatura não diferenciaram também outras espécies dos gêneros Kanthomonas, Pseudomonas, Enwinia, Stenotrophomona e Pantoea. A otimização das diluições para PCR/TR a partir de cDNA foi de apenas lOX. Porém, para extratos de DNA de planta, foi maior, de lOOX a lOOOX,indicando a maior sensibilidade do método. Dos 28 pares de iniciadores testados, os melhores para o agente causal de cada doença e curvas de diluições (com eficiência de PCR de 1,05 a 1,28) são apresentados