Produção de proteínas recombinantes para avaliação de resposta celular contra Mycobacterium bovis.

Tuberculose bovina é uma enfermidade infecciosa, causada pela bactéria Mycobacterium bovis. Esta enfermidade tem acometido rebanhos de vários países, inclusive do Brasil, causando problemas econômicos e de saúde pública. Animais infectados com M. bovis, primariamente, apresentam resposta imune celular e, devido a isso, o teste intradérmico com PPD (Purified Protein Derivative) é amplamente utilizado nos programas de controle da doença. Entretanto, a tuberculinização possui algumas desvantagens, como a detecção de reações cruzadas e necessidade de imobilização dos animais em dois momentos distintos. Além disso, bovinos submetidos à intradermorreação tornam-se temporariamente anérgicos, e em casos de reações inconclusivas, não podem ser re-testados por pelo menos 60 dias. Uma forma de minimizar esses problemas é o desenvolvimento de testes de diagnósticos in vitro, nos quais a capacidade de antígenos estimularem a liberação de citocinas é mensurada. O objetivo deste trabalho foi produzir as proteínas PE5 e ESAT-6 de M. bovis em sistema heterólogo de expressão para posterior avaliação da indução de resposta celular de bovinos. Os genes pe5 e esat-6 foram amplificados por PCR (Polymerase Chain Reaction), clonados em plasmídeo pGEM-T Easy e subclonados em plasmídeo pRSet-C. A expressão dos genes foi verificada por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida, bem como por Western blot com anticorpo monoclonal anti-histidina. Foi possível observar proteínas de 15 e 16 kDa, que correspondem, respectivamente, às massas moleculares estimadas das proteínas recombinantes PE5 e ESAT-6 fusionadas a cauda de histidina. No Western blot, as proteínas recombinantes foram reconhecidas pelo anticorpo monoclonal. ESAT-6 é um dos antígenos de M. bovis mais bem documentados, demonstrando sensibilidade de moderada a alta em diversos testes de diagnóstico e a proteína PE-5 demonstrou anteriormente alta especificidade. Portanto, a utilização destas proteínas, individualmente ou em conjunto, poderá incrementar o diagnóstico da tuberculose bovina em testes de tuberculinização intradérmica e de dosagem de interferon-γ