Regulación de la citocinesis en S. pombe mediante Etd1p

Resumen del póster presentado al XXXVII Congreso de la Sociedad Española de Genética, celebrado en Torremolinos (Málaga) del 29 de septiembre al 2 de octubre de 2009.En Schizosacaromyces pombe, la contracción del anillo de actomiosina es activada por la ruta SIN (septation initiation network), una cascada de protein-kinasas que coordina la salida de mitosis con la citocinesis. La proteína Etd1 es un elemento de la ruta SIN, esencial para la citocinesis. A falta de esta proteína, el anillo de actomiosina se forma, pero no se contrae y el anillo es finalmente desarmado, dando lugar a la formación de células muy largas, multinucleadas. Durante interfase Etd1p localiza en las puntas de la célula, en la membrana. A la entrada en mitosis aparece como una banda ancha en el ecuador de las células y se compacta en anafase formando un anillo. Después de la contracción del anillo de actinomiosina, Etd1p localiza en las nuevas membranas celulares que separan a las células hijas Etd1p es una proteína de 392 aminoácidos que presenta poca o ninguna homología con otras proteínas conocidas. Por lo tanto, para entender el papel de Etd1p en la citocinesis hemos diseñado una serie de deleciones de la proteína a fin de determinar el dominio mínimo necesario para su función y su localización. Este enfoque nos ha permitido identificar una región N-terminal que determina la localización de la proteína y un dominio C-terminal responsable de su función. La ruta SIN controla la actividad de la β1-3 glucan sintasa y sabemos que en ausencia de Etd1p esta proteína no está activa. Además, la actividad de la β1-3 glucan sintasa está controlada por la GTPasa Rho1p. Nosotros demostramos que los niveles de Rho1p activo decrecen en ausencia de Etd1p y aumentan cuando sobreexpresamos esta proteína, sugiriendo que Etd1p está regulando el estado GTP/GDP de Rho1p. Para estudiar si esta regulación es directa o indirecta decidimos ensayar si estas dos proteínas forman un complejo, para ello se marcaron con diferentes epitopos y se realizó un experimento de inmunoprecipitación. El resultado fue que ambas proteínas inmunoprecipitan en un mismo complejo. Además, usando varias truncaciones de Etd1p determinamos que la región Cterminal de la proteína era la región mínima necesaria para dicha interacción. Para comprobar si Etd1p es un regulador específico de Rho1p o de cualquier otra GTPasa, estamos comprobando la interacción con Spg1p, otra GTPasa esencial para citocinesis. Asimismo estamos realizando ensayos in vitro para determinar si Etd1p está actuando como un GEF o como otro tipo de regulador.Peer Reviewe