Estudo de produção enzimatica da dextrana clinica

Resumo: Este trabalho consiste na obtenção "in vitro" de dextrana clínica a partir da sacarose utilizando a enzima dextrana-sacarase obtida pela fermentação do Leuconostoc mesenteroides linhagem NRRL B512-F. A dextrana clínica, de peso molecular médio 40.000 daltons, tem sua aplicação consagrada como expansor volumétrico de sangue humano. A enzima foi produzida por fermentação e purificada usando ultrafiltração, separada com o uso de polietilenoglicol de peso molecular 1500 daltons e estocada a -10°C. O estudo da produção de dextrana clínica foi feito obedecendo 2 etapas de síntese, sendo que para cada uma delas foi realizado um delineamento experimental. No primeiro usou-se maltose como aceptor e no segundo dextrana de peso molecular 4676 daltons. O objetivo dó primeiro delineamento foi otimizar as condições para obtenção de dextrana de peso molecular próximo a 5000 daltons e no segundo para obtenção da dextrana clínica propriamente dita. Determinou-se o rendimento e a distribuição de pesos moleculares da dextrana produzida por um sistema de cromatografia de permeação em gel (HPLC). Os resultados do processo de síntese enzimática de dextrana, foram utilizados' ,para obtenção dos modelos de rendimento e distribuição de pesos moleculares em função da concentração de sacarose, relação R ([aceptor]/[sacarose]) e temperatura. Através da metodologia de superfície de resposta conclui-se que a concentração de sacarose é a variável que mais influencia no processo de síntese enzimática de dextrana. Os parâmetros, para produzir dextrana em torno de 40.000 daltons com maior rendimento, foram altas concentrações de sacarose (133,6 g/l), altos valores da relação R (0.0384)e baixas temperaturas (18.3°C)Abstract: This study consists of the "in vitro" production of clinical dextran from sucrose using the enzyme dextransucrase obtained from Leuconostoc mesenteroides NRRl B512-F. Clinical dextran, whose average molecular weight is 40,000 daltons, is extensively used as a volume expander of human blood. The enzyme was produced by fermentation; purified by ultracentrifugation, separated using polyethylene glycol (mol. weight 1500 daltons) and stored at -10°C. The study of the production of clinical dextran was carried out according to the two steps of synthesis, an experimental design being produced for each step. In the first step maltose was used as an acceptor and in the second, dextran with a molecular weight of 4676 daltons. The objective of the first design was to optimize the conditions to obtain dextran with a molecular weight of about 5000 daltons, and the second design ained at obtaining the actual clinical dextran. The yield and the molecular weight distribution of the dextran produced was determined by a high performance gel permeation chromatography system (HPLC). The results of the process for the enzymatic synthesis of dextran were used to obtain models for the yield and the molecular weight distribution as conditions of sucrose concentrations, the ratio R and temperature. Using surface response methodology, it was conclucted that the sucrose concentration was the variable that most affected . the enzymatic synthesis of dextran. The parameters required to produced greater yields of dextran with a molecular weight of about 40,000 daltons were: high concentrations of sucrose (133,7 g/l), low temperatures (18,3°C) and high values to the relationship R (acceptor]/[sucrose]) of 0,038