Taxomnomic caracterization of endophytics actinomycetes producteurs of antibiotic cupuçu seeds isolated .

Resumo: Plântulas de cupuaçuzeiro (Theobroma grandiflorum) cultivadas a partir de sementes na Universidade Federal do Amazonas (Manaus, AM) foram amostradas com 15, 30, 45 e 60 dias após germinação para análise da microbiota bacteriana endofítica associada. Após esterilização de superfície de folhas e raízes, seguido de plaqueamento nos meios (ISP 2 com amido, ágar amido-caseína e ágar rafinose-histidina) e incubação a 30° C, foram isoladas 52 linhagens de actinomicetos endofíticos. Destas, sete foram isoladas de folhas (13,5%) e 45 de raízes (86,5%). Atividade antimicrobiana avaliada em cultivos em meio sólido foi detectada em 23 linhagens (44,2%), as quais foram antagônicas para Bacillus subtilis (21,7%), Escherichia coli (17,4%), Staphylococcus aureus (39,1%), Candida albicans (30,4%) e Aspergillus flavus (17,4%). Em contraste, apenas seis linhagens (11,5%) mostraram atividade antimicrobiana contra Candida albicans quando incubadas em meio líquido. As linhagens de actinomicetos endofíticos isoladas de raízes apresentaram maior taxa de atividade antimicrobiana (87%) que os isolados de folhas (13%). A identificação clássica mostrou que a grande maioria dos isolados (42 linhagens, 80,8%) pertence ao gênero Streptomyces. A análise de restrição de rDNA amplificado (ARDRA) com Alu I, Dde I, Hae III, Rsa I, Msp I, Sau3A I e Taq I revelou a existência de 17 perfis distintos dentre estes isolados. Os dados derivados das análises de seqüências de rDNA 16S sugerem a provável existência de novas espécies de Streptomyces dentre as linhagens isoladas de cupuaçu.Abstract: Cupuaçu seeds (Theobroma grandiflorum) planted at the Universidade Federal do Amazonas (Manaus, AM, Brazil) were harvested after 15, 30, 45 and 60 days after germination and subjected to the isolation of endophytic bacteria. Fifty two endophytic actinomycetes were isolated from surface-sterilized leaves and roots using ISP 2 medium supplemented with starch, Starch-Casein and Raffinose-Histidine Agar, after incubation at 30° C. From these, seven isolates (13.5%) were obtained from leaves and 45 (86.5%) from roots. Antimicrobial activity in solid media was detected in 23 strains (44.2%), which were antagonistic for Bacillus subtilis (21.7%), Escherichia coli (17.4%), Staphylococcus aureus (39.1%), Candida albicans (30.4%) and Aspergillus flavus (17.4%), whereas only six isolates (11.5%) showed activity against Candida albicans when grown in liquid medium. Endophytic actinomycetes isolated from roots showed higher antimicrobial activity (87%) compared to isolates from leaves (13%). Taxonomic characterization showed that the majority of isolates recovered, 42 strains (80.8%), belonged to the genus Streptomyces. Restriction analysis of 16S rDNA fragments (ARDRA) using Alu I, Dde I, Hae III, Rsa I, Msp I, Sau3A I and Taq I enzymes revealed the presence of 17 different clusters among theses isolates. Phylogenetic analyses of 16S rDNA sequences suggest the existence of novel taxa amongst the endophytic streptomycetes strains recovered from cupuaçu seedlings