Avaliação dos metodos de determinação e incidencia de aflatoxina M1, patulina e acido ciclopiazonico em alguns alimentos brasileiros

Resumo: Avaliou-se os métodos analíticos e a incidência de aflatoxina, patulina e ácido ciclopiazônico em produtos alimentícios comercializados na cidade de Campinas. Varias tentativas foram realizadas para a escolha do solvente extratante e da melhor técnica para remover os interferentes das amostras de leite e derivados para determinação de aflatoxina M1. Na extração foram utilizados acetona, metanol e clorofórmio puros, misturados entre si ou com água. Precipitação com sais de metais pesados, partição entre solventes imiscíveis e colunas cromatográficas foram avaliados para promover a limpeza do extrato. A utilização de metais pesados não foi eficiente para eliminar os interferentes. O uso conjunto de clorofórmio e uma coluna cromatográfica demonstrou ser a maneira mais eficiente de extrair a aflatoxina e remover substâncias interferentes. Colunas cromatográficas de sílica e sílica-C18 presentaram melhores resultados que a coluna de celulose. A cromatografia líquida de alta eficiência dos derivados com ácido trifluoroacético e detecção por fluorescência apresentou sensibilidade e especificidade bem maior que o método por cromatografia em camada delgada com quantificação visual da intensidade de fluorescência para determinação de aflatoxina M1. Duzentas e quatro amostras de leite pasteurizado (103), leite em pó (35), queijos (36) e iogurte (30) coletadas durante os anos de 1989/90 e de 1992 foram analisadas. A aflatoxina M1 foi encontrada em apenas quatro amostras de leite pasteurizado com níveis de 73 a 370 ng/L em 1992, ano em que as análises foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência. Três métodos foram avaliados para a determinação de patulina: os da AOAC (1990), de SIRIWARDANA & LAFONT (1979b) e de MOLLER & JOSEFSSON (1980). A quantificação foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência, inclusive para os dois primeiros métodos nos quais a técnica especificada era cromatografia em camada delgada. O método de MOLLER & JOSEFSSON foi o que apresentou melhores porcentagens de recuperação e um extrato mais limpo, resultando um cromatograma cujo pico da patulina apareceu livre de interferentes. Sessenta e cinco amostras de sucos de frutas (maçã (20), uva (17) , abacaxi (10), goiaba (6) , manga (6) , mamão (3) e banana (3)) e 24 amostras de frutas (maçã (15), mamão (6) e manga (3)) foram analisadas e apenas uma de suco de maçã estava contaminada por patulina com 17 µg/L. Seis amostras de maçã deteriorada foram também analisadas e todas continham patulina em níveis que variaram de 150 a 340 µg/ kg. Foi investigada também a ocorrência simultânea de ácido ciclopiazônico e aflatoxinas B e G em amostras de amendoim, milho e seus derivados, utilizando o método de URANO et all (1992a) e de SOARES & RODRIGUEZ-AMAYA (1989), respectivamente. Em 28 amostras de amendoim e derivados, a presença de ácido ciclopiazônico foi constatada em 4 amostras de amendoim cru, com níveis de 150 a 369 µg/kg. As aflatoxinas foram encontradas em 11 amostras de amendoim cru, amendoim torrado salgado e paçoca com teores de 8 a 340 µg/kg (aflatoxinas totais). As duas toxinas ocorreram simultaneamente em três amostras de amendoim cru. Tanto ácido ciclopiazônico como as aflatoxinas não foram detectados em 25 amostras de milho e derivados (milho de pipoca, farinha de milho e fubá). Os resultados demonstram que a contaminação de leite e derivados por aflatoxina M1 e de frutas e sucos de frutas por patulina não constitui um problema de saúde pública na cidade de Campinas. Por outro lado, a ocorrência de ácido ciclopiazônico agrava ainda mais a situação do amendoim e seus derivados que são largamente contaminados por aflatoxinas B e G. Estas duas também não são problemáticas em milho e derivadosAbstract: In Brazil there is a paucity of information in relation to the mycotoxins aflatoxin M1, patulin and cyclopiazonic acid. Thus, these mycotoxins were investigated in terms of the analytical methods used for their determination and of their incidence in food products commercialized in Campinas. Various trials were carried out to choose the extracting solvent and the best technique for removing interfering substances from samples of milk and dairy products for the determination of aflatoxin Ml. For extraction acetone, methanol and chloroform were utilized either singly, in combination with each other or with water. Precipitation with heavy metal salts, partition between immiscible solvents and conventional column chromatography were evaluated for clean-up. Heavy metals by themselves were not effective in eliminating interfering substances. The combined use of chloroform and a chromatographic column proved to be the most efficient procedure for extraction and clean-up. Columns packed with silica or silica-C18 gave better results than those of cellulose. High performance liquid chromatography of trifluoroacetic acid derivatives and using fluorescence detection, presented much higher sensitivity and specificity than thin layer chromatography with visual quantification of the fluorescence intensity for aflatoxin M1 determination. Two hundred and four samples of milk (103), powdered milk (35) , cheese (36) and yoghurt (30), collected in 1989/90 and in 1992, were analyzed. Aflatoxin M, was found in only 4 samples of milk at 73 to 370 ug/L in 1992, the year when the analyses were carried out by high performance liquid chromatography. Three methods for the determination of patulin were evaluated: those of the AOAC (1990), SIRIWARDANA & LAFONT (1979b) and MOLLER & JOSEFSSON (1980). Quantification was performed by high performance liquid chromatography, even for the first two methods where thin layer chromatography was the specified technique. The method of MOLLER & JOSEFSSON presented higher recovery perceriteges and resulted in a clean extract, giving chromatograms with the patulin peak free of interferences. Sixty-five samples of fruit juices (apple (20), grape (17), pineapple (10), guava (6), mango (6), papaya (3) and banana (3)) and 24 samples of fruits (apple (15), papaya (6) and mango (3)) were analyzed and only one sample of apple juice had patulin at 17 ug/L. Six samples of spoiled apple were also submitted to analysis, all of which were contaminated with patulin at 150 to 340 ug/ kg. The co-occurrence of cyclopiazonic acid and aflatoxins B and G in peanuts, corn and their products was also investigated, using the methods of URANO et alii (1992) and SOARES & RODRIGUEZ-AMAYA (1989) , respectively. Of 28 samples of peanuts and peanut products, cyclopiazonic acid was encountered in 4 samples of raw peanuts at 150 to 369 ug/ kg. Aflatoxins were found in 11 samples of raw peanuts, roasted salted peanuts and ground peanut bar at 8 to 340 ug/kg (total aflatoxins). The two toxins co-existed in 3 samples. Cyclopiazonic acid and aflatoxins were not detected in 25 samples of corn (popcorn, corn flour and grits). The results show that contamination of milk and dairy products with aflatoxin M1 and of fruits and fruit juices with patulin does not constitute a public health problem in the city of Campinas. On the other hand, the occurrence of cyclopiazonic acid can aggravate the situation of peanuts and peanut products, already shown to be highly contaminated with aflatoxins B and G. These two toxins are not problematic in corn and corn product