Desenvolvimento, validação e aplicação de metodologia para analise de acido folico em alimentos enriquecidos

Resumo: O conhecimento dos níveis de enriquecimento dos alimentos, com ácido fólico (AF), tem sido dificultado, especialmente, pela falta de metodologias apropriadas. Visando atender a esta necessidade, foi desenvolvida e avaliada uma metodologia para determinação do ácido fólico em alimentos enriquecidos, utilizando a cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE). O método desenvolvido foi aplicado em 36 diferentes tipos/marcas de alimentosenriquecidos,comoleiteempó, leite sterilizado,bebidaláctea, queijotipopetit suisse, cereal matinal e farinha láctea. As vantagens do método proposto foram versatilidade, simplicidade e rapidez, principalmente das etapas de extração e limpeza. A extração do AF foi feita com KOH (O,lmol/L), através de vibração ultra-sônica por 10minutos, e a limpeza do extrato com H3P04 (O,lmol/L), tampão fosfato e ácido tricloroacético. Através dos resultados obtidos pelo método de superficie de resposta, constatou-se que essas etapas foram realizadas dentro da faixa ótima para todos os parâmetros estabelecidos. No sistema cromatográfico utilizou-se coluna de fase reversa CI8, e a eluição por gradiente permitiu uma corrida rápida de apenas 9 minutos, necessitando demais 5 minutos para o re-equilibrio da coluna, antes de uma nova injeção. A detecção foi feita a 29Onme a quantificação por curva de padronização externa. Os limites de detecção e quantificação e a recuperação, determinados nos níveis de enriquecimento para o leite em pó, foram 1,3nglrnL, 2,6nglrnL e 98,6%, respectivamente. Testes de repetibilidadeapresentaram coeficientes de variação inferiores a 7,3%. Dos alimentos enriquecidos analisados, 25 foram produtos lácteos, sendo que em 16 deles o ácido fólico estava presente em quantidade igual ou superior a declarada, 7 produtos apresentaram quantidades inferiores, principalme mesmo fabricante, de queijo tipo petit suisse, embora constasse no rótulo, não foi detectado ácido fólico. Entre cereais matinais e farinhas lácteas foram analisadas 11 amostras, das quais somente 5 apresentaram concentrações iguais ou superiores às especificadas nos rótulos. Os resultados obtidos neste trabalho, além de demonstrarem as vantagens e aplicabilidade da metodologia desenvolvida e validada, apontam para a necessidade demaior rigor no controle das taxas de enriquecimento destes alimentos e reforçam a necessidade de futuros estudos de vida de prateleira dos mesmosAbstract: Food enrichment with folic acid (FA) has been difficult to control, due to the lack of appropriate methodology. With the aim of solving this problem, methodology for the determination of folic acid in enriched foods was developed and evaluated, using high performance liquid hromatography (HPLC). The method developed was applied to 36 types/brands of enriched foods, such as powdered milk, sterilized milk, milk based beverages, petit suisse type cheese, breakfast cereais and milk based mixes. The advantages of the method proposed were versatility, simplicityand speed, especially in the extraction and clean-up steps. tTItrasonicationfor 10 minutes in KOH (0.1 mol/L) was used to extract the FA, followed by a clean-up procedure using H3PO4(0.1 mol/L), phosphate buffer andtrichloroacetic acid. Response surface methodology applied to the results, showed that these steps were carried out within the optimum range for all the parameters established. In the chromatographic step, a CI8 reverse phase column was used, and gradient elution allowed for a quick run of only 9 minutes, requiring a further 5 minutes to re-equilibrate the column before injecting another sample. Detection was at 290nm and quantification bymeans of an external standard curve. For the determination of the enrichment levels in powdered milk, the limits of detection, quantification and recuperation were respectively 1.3ng/mL, 2.6ng/mL and 98.6%. Repeatability tests presented coefficients of variation below 7.3%. Ofthe enriched foods analyzed, 25 were milk based, and in 16 ofthese, folicacid was present in amounts equal to or greater than those declared on the label, whilst in 7 products the values were below those declared, these being mainly sterilized milk samples and milk based beverages. In two samples of petit suisse type cheese, both ftom the Same manufacturer, folic acid was not detected, although it appeared on the label. Of the 11samples of breakfast cereal and milk based mix analyzed, only 5 presented concentrations equal to or greater than those specified on the label. In addition to showing the advantages and applicability of the methodology developed and validated, the results of this study showed the need for greater control of the enrichment levels of these foods, and reforcedthe need for further studies on the shelflife ofthe product