Association of Epstein-Barr virus with anti-CCP antibodies, the shared epitope alleles and smoking in Brazilian patients with rheumatoid arthritis

A etiopatogenia da Artrite Reumatoide (AR) envolve fatores genéticos, imunológicos e ambientais que interagem entre si. Os principais fatores de risco estudados são a presença dos alelos do epítopo compartilhado (shared epitope- SE), dos anticorpos anti-peptídeos cíclicos citrulinados (anti-CCP) e do tabagismo. Há evidências que o Epstein-Barr vírus (EBV), ao interagir com esses fatores de risco, possa causar uma resposta imune anômala em indivíduos susceptíveis. Essas interações também podem contribuir para o desenvolvimento da AR. O objetivo principal desse estudo é estabelecer se há uma associação entre o EBV com os alelos do SE, os anticorpos anti-CCP e o tabagismo em pacientes brasileiros com AR. Os objetivos secundários são: avaliar a correlação entre os alelos do SE, os anticorpos anti-CCP e o tabagismo; detectar a exposição ao EBV e quantificar sua carga viral e estimar o risco de cada fator estudado para o desenvolvimento da AR nessa casuística. Nesse estudo caso-controle, incluímos 140 pacientes brasileiros com AR e 143 controles saudáveis; pareados por idade, sexo e etnia. Foi feita uma caracterização clínico-laboratorial da casuística. Foram realizadas a genotipagem para identificar os alelos do SE, a determinação dos anticorpos anti-CCP pelo método de ELISA e coletada a história de tabagismo de todos os sujeitos da pesquisa. Para avaliar a exposição ao EBV, realizamos a dosagem dos anticorpos anti-Epstein-Barr Nuclear Antigen 1 (anti-EBNA1). Para quantificar a carga viral do EBV, realizamos o método quantitativo da reação em cadeia polimerase em tempo real ou real-time PCR. A análise comparativa entre os grupos mostrou uma positividade significativamente maior para os alelos do SE, anticorpos anti-CCP e tabagismo no grupo de pacientes. A análise dos anticorpos anti-EBNA1 mostrou uma positividade alta, tanto em pacientes como em controles, sem diferença significativa. Entretanto, a quantificação da carga viral pela PCR em tempo real mostrou-se muito maior em pacientes do que em controles (p<0.001). As análises associativas dos anticorpos anti-EBNA1 com os outros fatores estudados não se mostraram significativas; assim como as análises associativas da carga viral do EBV pela PCR em tempo real. A positividade do anti-CCP foi maior em pacientes com os alelos do SE que são tabagistas ou ex-tabagistas (p=0.038). Nas análises de regressão logística, a variável com maior risco para o desenvolvimento da AR foi a positividade dos anticorpos anti-CCP. Apesar dos pacientes com AR apresentarem uma carga viral do EBV aumentada, esse estudo não conseguiu associá-la aos demais fatores de risco estudados. Sugerimos que esses achados possam ocorrer devido a um controle deficitário do EBV em pacientes com AR, mas que não está relacionado aos fatores de risco mais conhecidos da doença. A imunidade celular defeituosa dos pacientes com AR dificulta o controle de uma infecção latente do vírus. Portanto, não é possível estabelecer uma relação causal direta entre o EBV e a AR.The pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA) involves genetic, immunological and environmental factors. The main risk factors are the presence of the shared epitope alleles (shared epitope- SE), anti-cyclic citrullinated peptide antibodies (Anti-CCP) and smoking. There is evidence that the Epstein-Barr virus (EBV), when interacts with these risk factors, may cause an abnormal immune response in susceptible individuals. These interactions may contribute to the development of RA. The main objective of this study is to establish whether there is an association between EBV and alleles of SE, anti-CCP antibodies and smoking in Brazilian patients with RA. Secondary objectives are the assessment of the correlation between alleles of SE, anti-CCP antibodies and smoking; the detection of EBV; the quantification of EBV viral load and the estimation of the likelihood of each analyzed factor for the development of RA in this sample. In this case-control study, we included 140 Brazilian patients with RA and 143 healthy controls; matched for age, sex and ethnicity. We performed a clinical and laboratory characterization of the sample. Genotyping was performed to identify SE alleles, anti-CCP antibodies were examined by ELISA and smoking information was collected from all subjects. To assess the exposure to EBV, we examined anti-Epstein-Barr Nuclear Antigen 1 (anti-EBNA1) antibodies. To quantify the viral load of EBV, we performed the quantitative method of polymerase chain reaction in real time or real-time PCR. The comparative analysis between groups showed a significantly higher positivity for the alleles of SE, anti-CCP antibodies and smoking in patients. The analysis of anti-EBNA1 antibodies showed a high positivity, both in patients and in controls, with no significant difference. However, the quantification of viral load by real-time PCR proved to be much higher in patients than in controls (p