Essential oil Citrus aurantifolia : chemical analysis and evaluation of anti-inflamatory and antioxidant effects on dystrophic muscle cells of mdx mice

Os anti-inflamatórios corticosteróides são os fármacos mais utilizados no tratamento da distrofia muscular de Duchenne. Porém, devido aos severos efeitos colaterais que apresentam, é fundamental a busca por terapias alternativas que minimizem a evolução da doença e melhorem a qualidade de vida dos pacientes distróficos e ao mesmo tempo apresentem menos efeitos colaterais do que os corticosteróides. Recentes estudos, em modelos experimentais, demonstram que os óleos essenciais extraídos de espécies do gênero Citrus apresentam potencial efeito benéfico sobre doenças associadas ao estresse oxidativo e/ou inflamação. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo realizar o estudo químico do óleo essencial de Citrus aurantifolia obtido a partir de prensagem a frio da casca dos frutos, seguido de destilação a vapor, comercializado sob o nome de Lima destilada e avaliar seu potencial efeito anti-inflamatório e antioxidante sobre células musculares distróficas de camundongos mdx. O estudo consistiu em duas partes. Na primeira realizou-se a caracterização do perfil químico por CG-EM e a avaliação da atividade antioxidante in vitro do óleo essencial utilizando-se os ensaios de redução do radical DPPH e ORACFL. A segunda parte consistiu na administração do óleo essencial de C. aurantifolia in vitro sobre células musculares distróficas de camundongos mdx. Após o tratamento, avaliou-se a toxicidade do óleo essencial, e realizou-se a quantificação de H2O2 e de TNF-α, NF-κB e 4-HNE nas células musculares (Western Blotting). O óleo essencial de C. aurantifolia estudado apresentou como constituintes químicos majoritários o limoneno (42,6%), α-terpineol (11,76%), cimeno (11,80%), γ-terpineno (4,63%) e terpinoleno (5,30%), com resultados coerentes com o esperado para esta espécie vegetal; apresentou-se ativo com capacidade antioxidante in vitro nos ensaios DPPH (forte resultado antioxidante na diluição 1:250 (v/v) em metanol) e ORACFL (950 µmol/TE g -1); demonstrou não ser tóxico, uma vez que a viabilidade celular, tanto nas células controle (C57BL/10) como nas células distróficas, se manteve acima de 90%; atenuou os efeitos deletérios que ocorrem nas células musculares distróficas, no que diz respeito à inflamação (reduziu o conteúdo de TNF-α) e estresse oxidativo (reduziu o conteúdo de 4-HNE e a produção de H2O2). Diante do exposto, acreditamos que o óleo essencial de Lima destilada possa ser potencialmente útil para o tratamento farmacológico da distrofia muscular. Entretanto, são necessários estudos futuros para se verificar qual é a dosagem e o tempo de tratamento adequados para se obter o melhor efeito deste óleo essencial.Anti-inflammatory corticosteroids are the most commonly used drugs for the treatment of Duchenne muscular dystrophy. However, due to their severe side effects, it is essential to search for alternative therapies that minimize the evolution of the disease and improve the life quality of dystrophic patients while showing fewer side effects than corticosteroids. Recent studies in experimental models have shown that essential oils extracted from genus Citrus species have a potential beneficial effect on diseases associated with oxidative stress and/or inflammation. Thus, the aim of the present study is to perform the chemical study of the Citrus aurantifolia essential oil obtained from cold pressing the peel of the fruit, followed by steam distillation, marketed under the name Lima distilled and evaluate its potential antioxidant and anti-inflammatory effects on dystrophic muscle cells of mdx mice. The project consisted of two parts. The first was carried out to characterize the chemical profile by GC-EM and evaluation of in vitro antioxidant activity of the essential oil using trials reduction of DPPH radical and ORACFL. The second part consisted of the administration of the C. aurantifolia essential oil in vitro on dystrophic muscle cells from mdx mice. After treatment, the toxicity of essential oil was evaluated, the concentration of H2O2 was detected and TNF-α, NF-kB and 4-HNE levels in muscle cells were quantified (Western blotting). Essential Distilled Lime Oil studied showed important chemical constituents as major limonene (42.6%), α-terpineol (11,76%), cymene (11,80%), γ-terpinene (4,63%) e terpinolene (5,30%), with results consistent with expectations for this plant species; it was active with an antioxidant capacity in vitro on the DPPH and ORACFL assays (950 µmol/TE g -1); was not toxic, the cell viability in both control cells (C57BL/10) and in dystrophic muscle cells was above 90%; it also attenuated the deleterious effects that occur in dystrophic muscle cells in relation to inflammation (reduced TNF-α content) and oxidative stress (reduced 4-HNE content and H2O2 production). Therefore, we believe that the Essential Distilled Lime Oil can be potentially useful for the pharmacological treatment of muscular dystrophy. However, future studies are needed to check what is the dosage and period of treatment suitable to achieve the best effect of this essential oil