Evaluation of susceptibility of hyphae and conidia of dematiaceous molds to antifungal agent amphotericin B, itraconazole and voriconazole and terbinafine, and last in combination with the other antifungal agents

Nos últimos anos, os fungos demáceos têm sido intensamente reconhecidos como importantes patógenos, principalmente em pacientes imunocomprometidos, sendo reportadas como patogênicas mais de 100 espécies de 60 diferentes gêneros. O tratamento das infecções causadas por estes fungos é difícil, bastante demorado e algumas vezes sem sucesso, portanto, se fazem necessários mais estudos sobre a suscetibilidade destes patógenos a antifúngicos in vitro. Alguns autores têm demonstrado a excelente eficácia in vivo da terbinafina, em combinação com outros antifúngicos, para o tratamento destas infecções, porém são poucos os que avaliam seu efeito in vitro isoladamente, e menos ainda os relatos sobre associação desta com outros antifúngicos. A maioria dos trabalhos utiliza apenas o inóculo com conídios, que não é a principal morfologia do fungo encontrada no paciente. A realização de testes utilizando hifas poderia mimetizar as características do fungo no tecido infectado, demonstrando melhor o potencial terapêutico do antifúngico. Existem poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos, e nenhum deles realizado com fungos demáceos. Partindo deste princípio, foi investigada neste estudo a suscetibilidade in vitro de conídios e hifas fungos demáceos dos gêneros Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala e Fonsecaea frente a anfotericina B, itraconazol e voriconazol e terbinafina, e esta última em combinação com os demais antifúngicos através da metodologia do tabuleiro de xadrez e avaliação dinâmica de crescimento. Quando avaliados isoladamente, o voriconazol foi o antifúngico mais ativo, seguido de itraconazol, terbinafina e anfotericina B, utilizando conídios. Quando foi feita a associação, os resultados indicaram 100% de sinergismo nas interações entre terbinafina e voriconazol, 96,5% de sinergismo entre anfotericina B e terbinafina e 75,9% de sinergismo entre terbinafina e itraconazol. Nenhum caso de antagonismo foi observado. Voriconazol e itraconazol demonstraram maior atividade frente a hifas dos isolados avaliados, seguidos de terbinafina e anfotericina B. Os isolados de C. bantiana e F. pedrosoi demonstraram altos valores de CIM frente a anfotericina B. Os valores de CIM obtidos para as hifas foram menores que os dos conídios, chegando a duas ou quatro diluições abaixo do valor da CIM. Os resultados demonstraram 100% de sinergismo entre a terbinafina e os azólicos ou a anfotericina quando utilizadas hifas no sistema BCT. Concluindo, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que a forma de hifas dos isolados avaliados é mais suscetível que a de conídios frente aos antifúngicos avaliados tanto isoladamente, como em associação.In recent years, the dematiaceous fungi have been widely recognized as important pathogens, especially in immunocompromised patients, being reported as pathogenic, more than 100 species of 60 different genera. Treatment of infections caused by these fungi is difficult, time consuming and sometimes without success, therefore, more studies are needed about the susceptibility of the pathogens to antifungal agents in vitro. Some studies have demonstrated excellent in vivo efficacy of terbinafine in combination with other antifungals to treat these infections, but few ones have evaluated the in vitro effect of terbinafine alone, and even less are about association with other antifungal agents. Most used only the inoculum with conidia, which is not the essencial morphology of the fungus found in the patient. Testing susceptibility using hyphae could mimic the characteristics of the fungus in infected tissue, demonstrating more clearly the therapeutic potential of the antifungal agent. There are few reports in the literature on dynamic evaluation of mold growth, and none of them performed with dematiaceous fungi. With this assumption, was investigated in this study the in vitro susceptibility of terbinafine alone and in combination with amphotericin, itraconazole and voriconazole against conidia and hyphae of dematiaceous fungi belonging to genera: Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala and Fonsecaea, using the checkerboard methodology and evaluation of dynamic growth. When evaluated alone, voriconazole was the most active antifungal agent, followed by itraconazole, terbinafine and amphotericin B, using the broth microdilution method with conidia. In the association, the results indicated 100% of synergism in interactions between voriconazole and terbinafine, 96.5% of synergism between amphotericin and terbinafine and 75.9% of synergism between terbinafine and itraconazole. No case of antagonism was observed. Voriconazole and itraconazole demonstrated the highest activity with the use of BCT with hyphae of isolates evaluated, followed by terbinafine and amphotericin B. Isolates of C. bantiana and F. pedrosoi showed higher MIC values compared to amphotericin B. MIC values obtained for hyphae were lower than those of conidia two or four dilutions below the MIC value. The results demonstrated 100% synergistic interactions between terbinafine and azoles or amphotericin when testing hyphae in BCT system. In conclusion, the present results suggest that the hyphae form of tested isolates are more susceptible than conidia to the antifungal agent evaluated alone or in combination