Specific immunotherapy : effects on the expression of histamine receptors, histamine releasing factors, GATA-3 and y chain of high affinity IgE receptor on lymphomononuclear cells from Apis mellifera allaergic patients

As reações alérgicas à ferroada de inseto resultam de resposta exacerbada do sistema imune, com produção de elevados níveis de anticorpos IgE alérgeno-específicos e padrão de citocinas Th2. A diferenciação de linfócitos Th2 e a secreção de citocinas por estas células são reguladas pelo fator de transcrição GATA-3. A ligação da IgE ao seu receptor de alta afinidade (Fc?RI) em mastócitos e basófilos, promove a liberação de mediadores inflamatórios. Muitos estudos demonstram a eficácia da imunoterapia específica na dessensibilização e no desenvolvimento de tolerância em indivíduos com quadros graves de hipersensibilidade à ferroada de insetos, sobretudo da classe Hymenoptera. A histamina é o principal mediador liberado durante a resposta alérgica; através da ativação de diferentes receptores (HR1, HR2, HR3 ou HR4) as células do sistema imune podem ser tanto inibidas como estimuladas. Via HR1, a histamina estimula principalmente linfócitos Th1, enquanto inibe linfócitos Th2 via HR2. O receptor 4 desempenha papel central na diferenciação de linfócitos Th2 e também é capaz de modular a produção de citocinas. A liberação de histamina é regulada por fatores de liberação de histamina (HRF), sendo que os HRF dependentes de IgE induzem a liberação de histamina na fase tardia das reações alérgicas. Considerando-se todas essas informações, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos modulatórios da imunoterapia na expressão gênica dos receptores de histamina (HR1, HR2 e HR4), fatores de liberação de histamina (HRF) e cadeia ? do receptor de alta afinidade de IgE, além da expressão protéica do fator de transcrição GATA-3, em células linfomononucleares de pacientes alérgicos ao veneno de abelha. As células foram isoladas de pacientes submetidos à imunoterapia, em diferentes períodos do tratamento (Pré, 1, 3, 6, 12, 18 e 24 meses), após injeção subcutânea, e submetidas à cultura por 72 horas, com estimulo de veneno de abelha a 1 ng/ml. Indivíduos não alérgicos foram estudados como grupo controle. Com objetivo de avaliar a expressão gênica foram realizadas extração de RNA, seguida de síntese de cDNA e PCR, para avaliação da expressão protéica, utilizou-se a técnica de imunofluorescência. A expressão gênica de HR1 e HR4, assim como de HRF e da cadeia gama do Fc?RI foi significativamente reduzida ao final do período analisado. O receptor 2 de histamina não apresentou alterações bem definidas após 24 meses de imunoterapia. O fator de transcrição GATA-3 apresentou diminuição significativa na expressão a nível protéico. Nossos resultados demonstram que a imunoterapia específica ao veneno de abelha foi capaz de modular elementos envolvidos na resposta imuneAllergic disease is an abnormal response from the immune system, with high levels of allergen specific IgE antibodies and Th2 pattern of cytokines. Development of Th2 cells and the production of cytokines are regulated by transcription factor GATA-3. Binding of IgE to its high affinity receptor (Fc?RI) in mast cells and basophils induces inflammatory mediators' release. Many studies have shown the efficacy of specific immunotherapy. Histamine is an important mediator in allergy, through activation of distinct histamine receptors (HR1, HR2, HR3 or HR4) in the immune system; cells can be either stimulated or inhibited. Histamine can stimulate, by HR1 receptor, especially Th1 response, and inhibit particularly Th2 cells through HR2 activation. HR4 plays a central role in Th2 polarization and also modulates cytokine profile production. IgE-dependent histamine releasing factors (IgE-HRF) induce histamine release in late phase reaction. In regard of this information, the aim of this study was to evaluate the modulating effects of specific immunotherapy in gene expression of histamine receptors (HR1, HR2 and HR4), histamine releasing factor (HRF), in patients with allergy and the gama chain of Fc?RI, and also GATA-3 protein levels. Bee venom allergic subjects underwent specific bee venom immunotherapy (VIT) in different stages of treatment (Pre, 3, 6, 12, 18 and 24 months) were studied. Peripheral blood mononuclear cells were isolated after subcutaneous venom injection and submitted to culture for 24, 48 and 72 hours stimulated with 1ng/ml of bee venom. In parallel healthy subjects were studied as well. Total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and PCR were used to evaluate gene expression; GATA-3 protein expression was analyzed by immunofluorescence assay. Data from all time of cell culture - 24, 48 and 72 hours - were grouped and analyzed. Gene expression from HR1 and HR4 and also HRF and ? chain of Fc?RI were significantly reduced at the end of 24 months of immunotherapy. Histamine receptor 2 didn't show well established alterations. For transcription factor GATA-3 significant decrease at protein level was observed. Together, our results indicate that bee venom specific immunotherapy was able to modulate some of the elements involved in the immune respons