Aspectos histopatologicos e bioquimicos do loxoscelismo

As aranhas marrons (gênero Loxoscefes) são de grande importância médica, com os acidentes (Loxoscelismo) ocorrendo por todo o mundo. As atividades biológicas do veneno da aranha marrom usualmente incluem lesões dermonecróticas no local da picada, acompanhadas de hemólise, hemorragia e insuficiência renal. Neste trabalho, nós descrevemos a histologia da glândula produtora de veneno da L. intermédia (espécie que prevalece em Curitiba) através de métodos citoquímicos e imunohistoquímicos, microscopia eletrônica de transmissão e de varredura. A organização da glândula se assemelha à arquitetura geral das glândulas produtoras de veneno das aranhas. Nós observamos que as glândulas da L. intermédia possuem duas camadas de musculatura estriada, uma camada externa e uma interna em contato direto com uma estrutura semelhante ã membrana basal, separando a região muscular das células epiteliais. As células musculares são multinucleadas, com núcleos localizados na periferia celular e com seus citoplasmas ricos em retículo endoplasmático liso e miofibrilas. Utilizando microscopia eletrônica de varredura, nós mostarmos que as células musculares da camada externa têm morfologia ramificada. As células epiteliais têm retículo endoplasmático rugoso acentuado, coleções mitocondriais, complexo de Golgi evidente, ínterdigitações de membranas e vesículas secretoras contendo o veneno, sendo este uma mistura complexa de proteínas. Em outra investigação, através de eletroforese de poliacrilamida gradiente linear 3-20% na presença de dodecil sulfato de sódio e coloração monocromática pela prata, fomos capazes de mostrar que o veneno de L. intermédia é uma mistura complexa de proteínas que variam entre 5 a 850 kDa. O tratamento do veneno com tripsina ativa duas moléculas gelatinolíticas com 85 kDa e 95 kDa de massa molecular. Experimentos utilizando inibidores de proteases confirmaram que somente inibidores de serino-proteases foram eficientes no bloqueio da atividade proteolítica destas enzimas. Essas enzimas apresentam pH ótimo entre 7,0 e 8,0. A análise da especificidade funcional dos substratos dessas enzimas...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digitalThe brown spider, genus Loxoscetes, is becoming of great medical importance, with envenomation (Loxoscelism) occurring throughout the world. The biological activities of the brown spider venom usually include dermonecrotic lesions at the bite site accompanied by hemolytic and hemorrhagic effects and also by renal failure. We described the histology of the venom gland of L intermedia using immunohistochemical and staining methods, by transmission electron microscopy and by scanning electron microscopy. The organization of the venom gland of L. intermedia follows the general architecture of spiders venom glands. We observed that the venom glands present two layers of striated muscle fibers, an external layer and an internal layer in touch with a basement membrane structure and a fibrillar collagen matrix separating the muscular region from epithelial cells. Muscle cells are multinucleated, with nuclei peripherally placed and their cytoplasm rich in sarcoplasmic reticulum, myofibrils and continuous Z lines. By using scanning electron microscopy we can detect muscular cells from external layer as branching cells. Epithelial cells have their cytosol extremely rich in rough endoplasmic reticulum, mitochondria collection, Golgi apparatus, interdigitating membranes and secretory vesicles that ultimately accumulate the venom, a complex protein mixture. In the present investigation, when we submitted L. intermedia venom to linear gradient 3-20% SDS-PAGE stained by a monochromatic silver method we detected a heterogeneous protein profile in molecular weight, ranging from 850 kDa to 5 kDa. In an attempt to detect zymogen molecules of proteolytic enzymes, venom aliquots were treated with several exogenous proteases. Among them, trypsin activated two gelatinolytic molecules of 85 kDa and 95 kDa in the venom. In experiments of hydrolysis inactivation using different protease inhibitors for four major class of proteases, we detected that only serine-type protease inhibitors were able to inactivate the 85 kDa and 95 kDa enzymes in the venom. An examination of the 85 kDa and 95 kDa gelatinolytic activities as a function of pH showed that these proteases had no apparent activities at pH below 5.0 and higher ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertation