Seleção de microorganismos produtores de fosfolipase, otimização da produção e caracterização da enzima bruta

Seiscentas linhagens de fungos foram isoladas a partir de amostras de solo, frutos, resíduos industriais e testadas quanto à capacidade de hidrolisar fosfoglicerídeos (Iecitina de soja comercial) através da produção de fosfolipase extracelular. Destas linhagens, 96 foram pré-selecionadas como produtoras de fosfolipase por apresentarem formação de halo ao redor da colônia quando cultivadas em meio composto por ágar lecitina contendo o corante rodamina B. Para se verificar as melhores linhagens produtoras de fosfolipase, tais linhagens pré- selecionadas foram cultivadas em meio contendo 5% de caldo de maceração de milho (com steep liquor), 1% de glicose, 0,51% NaNO3, 0,1% KH2PO4, 0,025% MgSO4.7H2O, 0,0046% CaCI2, 0,000632% FeSO4.7H20 e 0,0000234% CuSO4.5H20, tendo seu pH ajustado para 4,5, a 25QC por 72 horas com agitação de 200 rpm. Duas linhagens (nQ212 e nQ 1068) foram escolhidas por apresentarem maior produção de fosfolipase. Alguns parâmetros para a produção de fosfolipase pelas linhagens escolhidas foram estudados, como a seleção do melhor meio de cultivo, efeito da incorporação de diferentes fontes de carbono e relação entre temperatura e tempo de incubação. As fosfolipases das linhagens 212 e 1068 foram caracterizadas bioquimicamente e apresentaram atividade ótima em pH 4,5 a 45°C. Ambas as enzimas não apresentaram atividade na ausência de CaCI2. Através de cromatografia de camada delgada (CCD) constatou-se que ambas as enzimas brutas foram capazes de hidrolisar a lecitina de soja comercial, transformando-a em lisolecitinaThe screening of phospholipase producing filamentous fungi was performed including 600 strains of microorganisms which were isolated from samples of soil, fruits and industrial residues. They were tested for phospholipase activity using a method based on lecithin agar and Rhodamine B. 96 strains were selected and its enzyme production were done using medium containing 5% com steep liquor, 1% glucose, 0,51% NaNO3,0,1% KH2PO4, 0,025% MgSO4.7H20, 0,0046% CaCI2, 0,000632% FeSO4.7H20 e 0,0000234% CuSO4.5H20, pH 4,5 at 25 for 72 hours. Two strains (212 and 1068)showed high phospholipaseactivity. The effect of olive oil as carbon source were examined in the culture medium. The crude enzymes showed high activity at 45°C and pH 4,5. The enzymes required Ca+2for the activity