Produção de lactosacarose por B-frutofuranosidase de Bacillus sp a partir de lactose e sacarose

Foram isoladas 1341 linhagens de microrganismos a partir de amostras de solos, flores e frutos e testados quanto à produção de (3-frutofuranosidase que, além da atividade hidrolítica sobre a sacarose, catalisa a formação de lactosacarose através da transferência de resíduo de frutosil provenientes da sacarose para o aceptor lactose. Seis linhagens de microrganismos foram preliminarmente selecionadas visando a produção de lactosacarose. Entre estas uma linhagem identificada como Bacillus sp n° 417 apresentou alta produtividade de (3-frutofuranosidase com atividade de transferência para produção de lactosacarose a partir de lactose e sacarose. O pH e a temperatura ótima de atividade da (3-frutofuranosidase foram 5,6 e 45°C, respectivamente. Verificou-se que, após 8 horas de reação, a proporção de lactose e sacarose 1: 1 (P/p) e 20% de concentração de açúcares totais, a uma temperatura de 45°C e pH 5,6, foram as melhores condições para produção de lactosacarose. A enzima (3-frutofuranosidase de Bacillus sp n° 417 foi purificada em coluna de troca iônica e o peso molecular da enzima foi estimado em 89.000 Da através de cromatografia em Sephadex G-200.One thousand and three hundred forty one strains of microorganisms were isoleted from soils, flowers and fruits samples and examinated for production of P-fructofuranosidase which hydrolyze sucrose to glucose and fructose. Those strains of p-fructofuranosidase producing microorganisms were tested for production of lactosucrose from mixture of lactose and sucrose. Six strains of microorganisms were selected as lactosucrose producers. Among them, one strain, identified as Bacillus sp, showed high β fructofuranosidase transfer activity to lactosucrose production. The optimum pH and temperature for lactosucrose production were 5,6 and 45°C, respectively. The best condition for the lactosucrose production were: 8 hours of reaction; a ratio lactose to sucrose of 1:1 (w/w) and a total sugar concentration of20% (1:1, w/w) The molecular weight of 89.000 Da for P-fructofuranosidase was estimated by Sephadex G-200 chromatography