Estudo do BAY 41-2272, um ativador da guanilato ciclase soluvel por mecanismo independente de oxido nitrico, em eosinofilos humanos

Os eosinófilos estão envolvidos no processo de defesa do organismo contra infecções parasitárias e na patogênese de doenças alérgicas, imunológicas e neoplásicas. Estudos anteriores demonstraram a existência de uma via funcional NO/GMPc em eosinófilos de rato e humano que modulam a locomoção deste tipo celular. Os nucleotídeos cíclicos são capazes de modular o processo de ativação de leucócitos, mas seu papel na locomoção é ainda controverso. Este estudo foi realizado para investigar os efeitos do 5-ciclopropil-2-[1-(2-fluor-benzil)-1Hpirazolo[ 3,4-b]piridina-3-il]-pirimidina-4-ilamina (BAY 41-2272) sobre a quimiotaxia de eosinófilos humanos induzida por formil-metionil-Ieucil-fenilalanina (fMLP; 10-7 M) e também sobre os níveis de guanosina-3',5'-monofosfato cíclico (GMPc) e adenosina-3',5'-monofosfato cíclico (AMPc). Os eosinófilos foram incubados com BAY 41-2272 (0,1-10,0 J.LM)por um período de tempo curto (10 min) ou prolongado (90 min). A exposição dos eosinófilos ao BAY 41-2272 tanto por 10 ou 90 min inibiu acentuadamente a quimiotaxia destas células. Na concentração de 1 J.LMde BAY 41-2272, a inibição da quimiotaxia foi em torno de 50%, independente se as células foram incubadas por 10 ou 90 min com este composto. A exposição dos eosinófilos por 90 min ao BAY 41-2272 (1 J.LM)resultou em significante aumento dos níveis de GMPc e AMPc (7,1 :!: 0,2 e 94,8 :!: 1,5 nMl1,5 X 106cels, respectivamente) comparado com o protocolo de 10-min (3,0 :!: 0,2 e 47,3 :!: 1,3 nM/1,5 X 106cels, respectivamente). O aumento dos níveis de GMPc produzidos BAY 41-2272 foi abolido pela pré-incubação dos eosinófilos com o inibidor da guanilato ciclase solúvel 1H-[1,2,4]-oxidiazol[4,3-a] quinoxalin-1-one (ODQ). De acordo com o ensaio de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difenil tetrazolio bromida (MTT), não foi observado qualquer efeito citotóxico sobre os eosinófilos em nenhuma das condições experimentais utilizadas. Nossos resultados mostram que o efeito inibitório do BAY 41-2272 sobre a quimiotaxia de eosinófilos humanos induzida por fMLP em tempo curto ou prolongado de incubação, é acompanhado por significante elevação de GMPc e AMPc, mas nós não detectamos uma correlação direta entre a inibição de quimiotaxia e elevação dos níveis de nucleotídeos cíclicosEosinophils are implicated in human defense mechanism against inflammatory disorders such as allergy, immunological and neoplasic diseases. Previous studies demonstrated a functional NO-cGMP pathway in the rat and human eosinophils that modulate the locomotion of this cell type. Cyclic nucleotides are able to modulate the processes responsible for leucocyte activation, but its role on eosinophillocomotion is still controversial. This study was designed to investigate the effects of the 5-cyclopropyl-2 [1-(2-fluoro-benzyl)-1Hpyrazolo[ 3,4-b]pyridin-3-yl]-pyrimidin-4-ylamine (BAY 41-2272) on formyl- . methionyl-Ieucyl-phenylalanine (fMLP; 10-7 M)-induced human eosinophil chemotaxis, cyclic guanosine-3',5'-monophosphate (cGMP) and cyclic adenosine- 3',5'-monophosphate (cAMP) levels. Human eosinophils were exposed to BAY 41- 2272 (0.1-10.0 J.1M) for either short (10 min) or prolonged (90 min) time periods. Exposition of eosinophils to BAY 41-2272 for either 10 or 90 min markedly inhibited the eosinophil chemotaxis. At 1 J.1Mof BAY 41-2272, inhibition of fMLP-induced eosinophil chemotaxis was about of 50% irrespective if cells were exposed for 10- or 90 min with this compound. Incubation of eosinophils for 90 min with BAY 41- 2272 (1 J.1M)resulted in significantly higher cGMP and cAMP levels (7.1 :!: 0.2 and 94.8 :!: 1.5 nMl1.5 X 106 cells, respectively) compared with the 10-min protocols (3.0 :!: 0.2 and 47.3 :!: 1.3 nM/1.5 X 106 cells, respectively). The BAY 41-2272- induced cGMP increases were abolished by pre-incubation of eosinophils with the soluble guanylate cyclase inhibitor -[1,2,4]-oxidiazolo[4,3-a] quinoxalin-1-one (ODQ). No eosinophil toxicity was observed in any experimental condition, according to 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay. Our findings show that inhibitory effects of fMLP-induced human eosinophil chemotaxis by BAY 41-2272 at short-term or prolonged exposition are accompanied by significant elevations of cGMP and cAMP, but we could not detect a direct correlation between chemotaxis inhibition and elevation of cyclic nucleotide level