Estudo da prevalencia das mutações 677(C-T) e 1298(A-C) no gene da metilenotetrahidrofolato redutase (5,10-MTHFR) em portadores de DFTN e seus pais em uma amostra populacional da região de Campinas

Dois polimorfismos decorrentes de duas mutações de ponto (C677T e A1298C) no gene da metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), enzima responsável pela ativação do ácido fólico no principal processo de metilação da homocisteína, vêm sendo referidos como fatores predisponentes à ocorrência de defeitos de fechamento do tubo neural (DFTN). O genótipo 677TT determina uma variante termolábil da MTHFR, com atividade reduzida a cerca de 50% e, consequentemente, aumento da homocisteína plasmática. Quanto ao segundo polimorfismo, apenas a dupla hetrozigosidade (CT/AC) parece estar associada a alterações bioquímicas semelhantes às descritas para o homozigoto 677TT. Embora os DFTNs compreendam três tipos anatomicamente distintos: anencefalia, encefalocele e espinha bífida, a maioria dos trabalhos que estudaram a relação entre as mutações no gene da MTHFR com esses defeitos o fizeram incluindo apenas as espinhas bífidas. Evidências epidemiológicas, por outro lado, sugerem que anencefalia, encefalocele e espinha bífida podem ser defeitos distintos e, possivelmente, eles possam ser classificados como defeitos altos (anencefalia, encefalocele, espinha bífida cervical e torácica) e baixos (espinhas bífidas lombares e sacrais). O presente trabalho investigou, por meio da técnica da PCR, essas duas mutações no gene da MTHFR em recém-nascidos portadores de DFTN e seus pais, compreendendo 119 famílias que foram registradas no Programa de Genética Perinatal (pROGEPE) no período de setembro de 1987 a dezembro de 2000. As fteqüências obtidas nessas famílias foram comparadas com aquelas encontradas numa amostra da população da mesma região formada por amostras de sangue de cordão colhidas, em duas etapas, dentro do período de desenvolvimento do projeto e durante o parto de recém-nascidos vivos e consecutivos que não apresentassem qualquer alteração morfológica diagnosticada até a data de sua alta da maternidade. Observou-se que a fteqüência do homozigoto mutante 677TT entre os propósitos foi de 13,5%, e nos demais grupos de 10,1% nas mães, 11,8% nos pais e 11,3% nos controles, não sendo observadas diferenças estatisticamente significativas entre os quatro grupos (i'(3) = 0,53; P = 0,91). O genótipo mutante 1298CC observado entre os propósitos, mães, pais e controles foram, respectivamente: 5,8%, 5,0%, 3,6% e 5,6%. Todas as fteqüências alélicas, seja para a mutação C677T, seja para a A1298C, em todos os grupos estudados mostraram-se estar em equilíbrio de Hardy- Weinberg. O genótipo duplamente heterozigoto (CT/AC) foi encontrado em 11,8% dos propósitos, 19,OOIÓ das mães, 20,2% dos pais e 13,2% dos controles, não sendo observada diferenças estatisticamente significativas (X:(3)= 3,93; P = 0,27).A distribuiçãodas freqüências dos genótipos homozigoto mutante (TT) e duplo heterozigoto (CT/AC) entre os sexos dos propósitos, bem como entre seus diferentes diagnósticos também não apresentaram diferenças estatisticamente significativas no presente estudo. Apesar desses resultados, a maior concentração do genótipo TT entre as espinhas bífidas lombares e sacrais, sugerem uma possível associação desse genótipo TI com os defeitos anatomicamente mais baixos. Finalmente, as freqüências muito baixas ou nulas das combinações genotípicas CT/CC, TT/AC e TT/CC, inclusive na população de controle, sugerem que tais associações são pouco viáveisTwo current polymorphisms of two point mutations (C677T and A1298C) in the gene of the methilenetetrahydrofolate reductase (MTHFR), responsible enzyme for the activation of the folic acid in the main process ofmetylation ofthe homocysteine, come being referred as predisponent factors to the occurrence of neural tube defects (NTD). The genotype 677TT determines a thermolable variant of MTHFR, with reduced activity about 50% and, consequent1y, increase of the plasmatic homocysteine. With relationship to the second polymorphism, just the double hetrozygosity (CT/AC) seems to be associated to biochemical alterations similar to described them for the homozygous 677TT. Although NTD understands three anatomically different types: anencephaly, encephalocele and spina bifida, most of the works that studied the relationship among the mutations in the gene of MTHFR with those defects they made it just including the spina bifida. Epidemiological evidences, on the other hand, suggest that anencephaly, encephalocele and spina bifida can be different defects and, possibly, they can be classified as high defects (anencephaly, encephalocele, cervical and thoracic spina bifida) and low (lumbar and sacrais spina bifida). The present study investigated, using the technique of PCR, those two mutations in the gene ofMTHFR in newbom carriers ofNTD and their parents, understanding 119 families that were registered in the Program of Perinatal Genetics (pROGEPE) in the period of September 1987 to December 2000. The obtained frequencies in those families were compared with those found in a sample of the population of the same area formed by picked samples of cord blood, in two stages, inside of the period of development of the project and during the childbirth of newbom alive and serial that didn't present any morphologic alteration diagnosed untU the date of its discharge of the maternity. It was observed that the ftequency of the homozygote mutant 677TT among the proposals was of 13,5%, and among the other groups of 10,1% in the mothers, 11,8% in the fathers and 11,3% in the controls, not being observed statistically significant differences among the four groups (r:(3)= 0,53;p = 0,91). The mutant genotype1298CCobserved among the proposals, mothers, fathers and controls were, respectively: 5,8%, 5,0%, 3,6% and 5,6%. AlI the allelic ftequencies, be for the mutation C677T, be for the A1298C, in all the studied groups they were shown to be in Hardy-Weinberg equilibrium. The double heterozygote genotype (CT/AC) was found in 11,8% ofthe proposals, 19,0% ofthe mothers, 20,2% of the fathers and 13,2% ofthe controls, not being observed statistically significant differences (i(3) =3,93;p = 0,27).The distributionofthe ftequenciesofthe homozygotemutant (TT) and double heterozygote (CT/AC) genotypes among the sexes of the proposals and their different diagnoses didn't also present statistically significant differences in the present study. In spite of those results, the largest concentration of the genotype TT among the lumbar and sacral spinas bifida, suggests a possible association of that genotype TT with the anatomically lower defects. Finally, the very low or null ftequencies of the genotypic combinations CT/CC, TT/AC and TT/CC, besides in the control population, suggest that such associations are little viabl