Contribuição da imunohistoquimica cutanea na avaliação das fibras nervosas no diabete melito tipo 2

Foram avaliados 49 pacientes (20 homens e 29 mulheres), portadores de diabete melito (DM) tipo 2, com idade média de 56.69 ±6.44 anos e duração da doença de 0.17 a 30 anos e 18 indivíduos saudáveis (4 homens e 14 mulheres), com idade média de 54.33 ± 7.48 anos. Os objetivos do estudo foram: 1) Avaliar o valor do processamento imunohistoquímico da inervação cutânea com anticorpo policlonal anti produto do gene protéico 9.5 (PGP 9.5), como método de detecção de comprometimento das fibras finas e conseqüente diagnóstico de neuropatia em pacientes portadores de DM tipo 2,2) Determinar a possibilidade de identificação diagnóstica dos subgrupos de diabéticos, classificados previamente por métodos clínicos e neurofisiológicos, com base nos resultados do número das fibras nervosas intra-epidérmicas (FNI) imunoreativas ao PGP 9.5 (PGP-IR), 3) Verificar o modelo de envolvimento das fibras nervosas no DM tipo 2. Os pacientes foram divididos em 4 subgrupos: classe 1 (n=15), ausência de neuropatia, classe 2 (n=8), neuropatia assintomática, classe 3 (n=8), neuropatia sintomática com estudo da condução nervosa (ECN) normal e classe 4 (n=18), neuropatia sintomática com ECN anormal. No grupo de diabéticos, o ECN, as escalas de sintomas e sinais e o reflexo cutâneo simpático (RCS) estavam alterados em 26 (53.06%) pacientes, 27 (55.1%) pacientes, 38 (77.6%) pacientes e 14 (28.5%) pacientes, respectivamente. Em indivíduos normais e diabéticos, amostras de pele de 3 mm de diâmetro foram retiradas da porção distal da perna direita, 10 cm acima do maléolo lateral e processadas pelo método de imunotluorescência indireta, usando anti PGP 9.5. A densidade linear, número de fibras intraepidérmicas por milímetro de epiderme, foi o parâmetro de quantificação empregado. As fibras intra-epidérmicas PGP-IR distribuíram-se por todas as camadas vitais da epiderme, apresentando - se com uma densidade linear de 7.04 :!: 2.46 nos controles e de 1.40 ± 0.97 nos diabéticos. Os subgrupos de diabéticos apresentaram densidade linear com os valores de 2.39 ± 0.53 para a classe 1, 1.51 ± 0.49 para a classe 2, 1.36 ± 0.41 para a classe 3 e 0.54 ± 0.79 para a classe 4. A densidade das fibras PGP-IR estavam significantemente (p=0.001) reduzidas nos pacientes das classes 3 e 4, quando comparados com os da classe 1. Os resultados obtidos sugeriram que a determinação da densidade linear das FNI, permite a detecção do envolvimento das fibras nervosas finas, contribuindo para o diagnóstico da neuropatia diabética, inclusive em estágios subclínicos, nos pacientes portadores de DM tipo 2, além de possibilitar a diferenciação entre o subgrupo classe 1 dos subgrupos classe 3 e 4. Foi constatado, também, comprometimento das fibras mielínicas grossas em 26 (53.06%) pacientes e da fibras finas em 49 (100%) pacientes, estabelecendo assim dois possíveis padrões de envolvimento de fibras nervosas no DM tipo 2, comprometimento associado das fibras grossas e finas e seletivo das fibras finas.Forty-nine patients (20 male and 29 female) with diabetes mellitus type 2 (DM-2) and 18 healthy individuais (controls; 4 male and 14 female) were evaluated. The mean age between patients with DM-2 and controls were 56.69 ± 6.44 and 54.33 ± 7.48 years, respectively. The aims of this study were as follows: 1) To evaluate the usefulness of immunohistochemistry with rabbit polyclonal antibody to protein gene product 9.5 (PGP 9.5) on the diagnosis of neuropathy in DM-2; 2) To determine by skin biopsy whether the number of epidermal nerve fibers (ENFs) immunoreactive (IR) to PGP 9.5 differ significantly between subgroups of patients with DM, that were previously investigated clinically and electrophysiologically; 3) To determine the pattern of involvement of nerve fibers in patients with DM-2. The patients were divided in four groups: Class 1 (n = 15), absence of neuropathy; Class 2 (n = 8), neuropathy without symptoms; Class 3 (n = 8), symptomatic neuropathy with normal nerve conduction study (NCS); Class 4, symptomatic neuropathy with abnormal NCS. Clinical symptoms, NCS, and sympathetic skin response were altered in 26 (53.06%), 27 (55.1%), 38 (77.6%), and 14 (28.5%) patients, respectively. Skin biopsies (3mm in diameter) were obtained trom the distal part of the right leg in both patients and controls. Skin biopsies were processed using immunofluorescence with anti-PGP 9.5. The linear density (number of ENFs per millimeter of epidermal length) was used for quantification. The nerve fibers PGP-IR were distributed throughout all the epidermal layers. The ENFs densities were 1.40 ± 0.97 and 7.04 ± 2.46 in patients with DM-2 and controls, respectively. The linear densities between groups of patients with DM-2 were as follows: Class 1, 2.39 ± 0.53; Class 2, 1.51 ± 0.49; Class 3, 1.36 ± 0.41; Class 4, 0.54 ± 0.79. The densities of fibers PGP-IR were significantly (p = 0.001) reduced in patients trom classes 3 and 4 when compared to those in the class 1. Our result suggest that measuring of nerve fibers PGP-IR densities allows early detection of the involvement of unmyelinated (C nociceptive ) and small myelinated (Aõ) nerve fibers in patients with DM-2,includingthose without clinicalsymptoms. In addition, it allows distinction between severa I degrees of involvement of small fibers into classes 1, 3, and 4. We also found that while ali patients (100%) had unmyelinated and small myelinated fibers dysfunction, only 26 (53.06%) patients had large myelinates fibers dysfunction. This finding indicates that two patterns of involvement of nervous fibers are found in patients with DM-2, the first associated with dysfunctionof both small e large nerve fibers, and the second selective to small nerve fibers