Myofibroblasts are frequent in the stroma and invasive front of oral squamous cell carcinomas where they control the tumoral behavior by stimulating cellular proliferation and matrix metalloproteinase 2 activity of the tumor cells

Miofibroblastos são caracterizados pela expressão de níveis elevados de fatores de crescimento, proteases e proteínas da matriz extracelular, que podem influenciar a progressão tumoral. Recentes estudos encontraram miofibroblastos no estroma de vários tipos de cânceres humanos, incluindo os de mama, rim, fígado, bexiga, cólon e próstata, sendo a presença dos miofibroblastos freqüentemente associada a um pior prognóstico. Os objetivos deste estudo foram avaliar a presença dos miofibroblastos em amostras de mucosa oral normal, leucoplasias com o diagnóstico histológico de displasia e 2 grupos de carcinomas espinocelulares (CEC) orais e correlacionar à presença destas células com as características clínico-patológicas dos tumores. O primeiro grupo foi formado por lesões exclusivamente de língua, enquanto que o segundo grupo foi composto por 38 CECs de várias localizações da cavidade oral. Adicionalmente, nós determinamos in vitro o efeito dos produtos da síntese das células de CEC oral sobre a transdiferenciação dos fibroblastos em miofibroblastos, bem como o efeito dos produtos de síntese dos miofibroblastos sobre a proliferação celular e atividade das metaloproteinases de matriz (MMP) nas linhagens celulares de CEC oral. A análise imunohistoquímica revelou a ausência dos miofibroblastos em amostras de mucosa oral normal e em lesões leucoplásicas com o diagnóstico histológico de displasia. Em contraste, miofibroblastos foram encontrados no estroma e/ou fronte invasivo de aproximadamente 60% das amostras de CEC oral. No primeiro grupo, a presença abundante dos miofibroblastos no estroma ou fronte invasivo do tumor correlacionou significantemente com o estádio clínico N, invasão linfática e vascular, presença de metástases histologicamente confirmadas em linfonodos e infiltração extra-capsular de metástases linfonodais. Presença abundante dos miofibroblastos foi também correlacionada com uma menor sobrevida global dos pacientes e com um maior potencial proliferativo das células tumorais. No segundo grupo de CECs orais, a presença abundante dos miofibroblastos correlacionou significantemente com o estádio clínico N, presença de células tumorais nas margens da peça cirúrgica e recorrência regional. Utilizando 4 linhagens celulares de CEC oral e 3 linhagens de fibroblastos de mucosa oral normal, nós demonstramos que as células tumorais induzem a transdiferenciação dos fibroblastos em miofibroblastos e que este evento é dependente da secreção de fator de crescimento transformante-β1 (TGF-β1) pelas células tumorais. Adicionalmente, nós demonstramos que os miofibroblastos secretam fatores que estimularam significantemente a proliferação celular e a produção de MMP-2 pelas linhagens celulares de CEC oral. Os resultados deste estudo sugerem que durante a progressão tumoral, as células neoplásicas secretam TGF-'β1que promove a transdiferenciação dos miofibroblastos, e por sua vez, miofibroblastos secretam fatores que induzem a proliferação celular e a produção de MMP-2 pelas células neoplásicas, favorecendo o crescimento e a invasão tumoral.Myofibroblasts are characterized by the expression of elevated amounts of growth factors, proteases and extracellular matrix, which may influence the tumor progression. Recent studies have detected myofibroblasts in the stroma of several tumors, including those of breast, kidney, liver, bladder, colon and prostate, being the presence of those cells associated with a worse prognosis for the patient. The goals of this study were to evaluate the presence of myofibroblasts in samples of normal oral mucosa, pre-malignant leucoplakia, and 2 groups of squamous cell carcinomas (SCC), and to determine whether their presence is associated with clinicopathological features of the tumors. The first group was composed exclusively by tongue lesions, whereas the second group was formed by 38 SCCs of several sites of the oral cavity. We also investigated in vitro the mutual paracrine effects of tumor cells and myofibroblasts on fibroblast-myofibroblast transdifferentiation and tumor cell proliferation and production of matrix metalloproteinases (MMP). Immunohistochemical analysis showed the lack of myofibroblasts in the stroma of normal oral mucosa and pre-malignant oral leucoplakias. In contrast, ~60% of the SCCs contained myofibroblasts in the tumor stroma and/or deep invasive front of the tumor. In the first group, the abundant presence of myofibroblasts in the stroma or deep invasive front significantly correlated with N stage, vascular and lymphatic invasion, histopathologically confirmed lymph node metastasis, and extracapsular spread of lymph node metastasis. The abundant presence of myofibroblasts was also correlated with a shorter patient's survival and the proliferative potential of the tumor cells. In the second group of oral SCCs, the abundant presence of myofibroblasts correlated significantly with N stage, presence of tumor cells at the surgical margins, and regional recurrence. Using 4 oral SCC cell lines and 3 primary oral normal fibroblasts (ONF) from buccal mucosa, we demonstrated that tumor cells induced transdifferentiation of ONFs to myofibroblasts via secretion of transforming growth factor-β1 (TGF-β1). Additionally, we demonstrated that transdifferentiated myofibroblasts secreted factors that significantly stimulated the cellular proliferation and production of MMP-2 by the oral SCC cell lines. The results of this study suggest that during tumor invasion SCC-derived TGF-β1 promote fibroblast to myofibroblast transdifferentiation, and in turn, myofibroblasts synthesize factors that induce cellular proliferation and production of MMP-2 by the tumor cells, favoring tumor growth and invasion