Estudo citoquimico e imunocitoquimico das celulas granulosas metriais em uteros de camundongos

As Células Granulosas Metriais (CGMs) presentes em úteros de roedores prenhes, apresentam como característica morfológica principal, um citoplasma repleto de grânulos, que contêm além da perforina, hidrolases e proteases. Estes grânulos são P AS positivos. Apresentam também antígenos de superficie que as caracterizam como sendo da linhagem NK. Porém, os fatores que determinam a sua diferenciação no endométrio, a composição química de seus grânulos, relacionada com a função destas células durante a gestação, ainda não são totalmente conhecidos. o presente trabalho foram utilizados camundongos prenhes no 9°, 11°, 13°, 5° e 17° dias de gestação (ddg), cujos fragmentos de sítios de implantação ou de placentas foram processados para inclusão em parafina, resina epóxi e resina LRWhite. Estes materiais foram submetidos aos métodos histoquímicos e cito químicos da lectina DBA (Dolichos biflorus), além da técnica de PAS, para a identificação e localização das CGMs. Foram ainda utilizados anticorpos policlonais anticatepsina D e B em métodos imunoistoquímicos e imunocitoquímicos para caracterizar a natureza lisossômica dos grânulos intracitoplasmáticos destas células. As CGMs foram identificadas ao longo do período gestacional analizado, tanto pela técnica de P AS quanto pela lectina DBA, tendo esta última apresentado maior seletividade. Estas células foram localizadas predominantemente no endométrio decidualizado e não decidualizado, e em menor proporção no miométrio da região mesometrial. A histoquímica da lectina DBA mostrou marcação nos grânulos e na superficie celular, que foi confirmada ao nível ultra-estrutural. Baseado nos padrões morfológico e histoquímico foram classificados 4 subtipos de CGMs. A freqüência destes subtipos variou no decorrer dos períodos analisados. Pelas reações imunocitoquímicas, as anticatepsinas D e B foram localizadas precisa e especificamente nos "caps" dos grânulos destas células. Os quatro subtipos de CGMs identificados no endométrio gravídico de camundongos devem corresponder às fases de diferenciação destas células, as quais podem ser identificadas pela marcação da lectina DBA na superficie celular. A presença de formas precursoras de CGMs isentas de grânulos, concomitantemente com formas em aparente degeneração ao longo do período gestacional analisado, sugere que o endométrio gravídico seja determinante para a diferenciação desta população celular. A imunocitoquímica para os anticorpos anticatepsinas D e B demonstraram que enzimas proteolíticas lisossômicas coexistem subcompartimentalizadas na região do "cap" dos grânulos das CGMs. A identificação destas enzimas proteolíticas pressupõe a sua atuação sinérgica com outros componentes líticos dos grânulos destas célulasThe Granulated Metrial Gland cell (GMG) found in the pregnant rodents uterus is characterized by its cytoplasm fulfilled with P AS positive granules which contain perforin and hydrolytic enzymes. This cell also pursues surface antigens that identify it as natural killer celllineage. However, the factors that determine the differentiation in the endometrium or, the biochemical composition of the granules related to the role of this cell during pregnancy remain to be elucidated. In the present work was used mice uterine fragments on 9°, 11°, 13°, 15° and 17° days of pregnancy. These materiaIs were processed for paraffin, epoxy resin and LRWhite resin embedding. The specimens collected were further processed by P AS and Do/ichos bilflorus (DBA) lectin cytochemistry for GMG identification and localization. Immunocytochemistry for anti-cathepsin D and B was performed to characterize the lysosomal nature of the GMG granules at light and electron microscoples. The GMGs were easily identified by both P AS and DBA-Iectin methods, but the later showed higher specificity. These cells were localized predominantly in the decidualized and no-decidualized endometrium and a few in the miometrium of mesometrial region of pregnant uterus. DBA-Iectin labeling was found on both granules and cells surface ofthe GMGs. Four subtypes ofGMGs were identified based on the morphology and on the cytochemical reaction pattem. These subtypes were found in the uterus through the period analyzed. The immunocytochemistry localized the anti-cathepsins D and B inside the granules, namely over the peripheral electrondense cap area. The 4 subtypes of GMGs found in the pregnant endometrium suggest that the differentiation steps of these cells that occurs from early post-implantation stage to peri-partum stage. Therefore, differentiation of GMGs seems to be committed to environmental changes of pregnant endometrium. The immunocytochemistry showed the cathepsin D and B localized in a peripheral cap of GMG granules. It suggests a speciallysosomal compartment inside the granules and their proteolytic enzymes could act synergicly with another granular component on lysis of target cell