Anomalias em complexo DNA-proteina de espermatozoides de touro : contribuição metodologica

Esfregaços de sêmen de touros com fertilidade conhecida foram submetidos a variantes metodológicas que visam a identificação de anomalias no complexo DNA-proteína, baseando-se na metacromasia induzida após coloração com azul de toluidina e na diferença de cores de tluorescência após coloração com "acridine orange". Buscou-se estabelecer métodos simples, eficazes e de baixo custo para a evidenciação de espermatozóides de touro com complexos DNA-proteína anomalos, associados a algumas formas de subfertilidade. Dos métodos testados, os tratamentos com 2-mercaptoetanol, solução SSC e HCI 4N antes da coloração mostraram-se eficientes na evidenciação de metacromasia induzida, sendo os dois primeiros mais eficazes que o último. Além disso o HCI4N mostrou-se mais simples e envolvendo menor custo do que os primeiros. Os métodos com "acridine orange" mostraram espermatozóides com maior intensidade de fluorescência em números semelhantes aos espermatozóides metacromáticos observados nos métodos com azul de toluidina. De maneira geral os animais com problemas de fertilidade apresentaram uma maior frequência de espermatozóides metacromaticos e com maior intensidade de fluorescência, porém nem todos esses animais apresentaram esta frequência aumentadaSmears of semen of known fertility have heen suhjected to varied methods with the objective of Dentifying chemical anomalíes in the DNA.protein complex, hased on the induced toluidine blue metaehromasy method and on the differenee of t1uorescenee eolors after aeridine orange staining. The main objeetive of this study was to find more efticient, simpler and eheaper methods to deteet the oeeurrenee of ahnormal DNA-protein complexes in buli spermatozoa associated with some types of subfertility. Among the methods tested, those using 2-mereaptoethanol, SSC solutíon and 4N HCI treatments prior to staining were the most efficient to demonstrate indueed metaehromasy. The first two methods were more efficient than the latter, but 4N HCI proved to be simpler aod eheaper than the others. As regards the methods employing aeridine orange as dye, the frequeney of sperm heads exhibitíng higher fluoreseence íntensity resembled that of the metachromatíc spermatozoa highlighted with the toluidíne blue methods. 10 general, the animaIs with fertility defects have a higher frequency of metachromatic spermatozoa and a greater acridíne orange fIuorescence intensity, but this cannot be taken as a rul