Estudos de farmacocinetica comparada de drogas (bioequivalencia), aplicação de tres diferentes metodologias na determinação de niveis circulantes de farmacos

O objetivo deste trabalho foi realizar três ensaios de farmacologia clínica, determinando diversos valores farmacocinéticos e utilizando-os para comparar duas formulações (em cada ensaio) da mesma droga, com origens diferentes. Os parâmetros analisados para elaboração do parecer quanto a bioequivalência foram AUC[0-12 (24) ou (48) h] e Cmax. Foram utilizados três grupos de voluntários sadios para que se obter as informações. Cada estudo foi composto por dois grupos de voluntários que se alternavam passando por dois períodos de internação cada, portanto todos os voluntários receberam as duas formulações da droga em estudo, sempre respeitando um período de, no mínimo, duas semanas de intervalo entre as internações. Este período garantia a total eliminação de uma formulação antes da administração da próxima. As drogas utilizadas foram: estudo 1- Ciclosporina solução oral aciclospor (Biosintética) e b- Sandimmun Neoral (Sandoz); estudo 2Lincomicina cápsula, a- Lincomicina (abbott) e b- Lincocin (Upjohn) e estudo 3- Ambroxol cápsula, a- Ambril (Merck S.A.) e b- Ambroxol (Euderma SPA). Cada estudo obedeceu a legislação nacional, seguindo sempre os padrões mundiais estipulados pela OMS e aqueles regulamentados pelo FDA. Os estudos foram realizados utilizando 24, 14 e 18 voluntários para ciclosporina, lincomicina e ambroxol respectivamente. Todos os protocolos foram submetidos à apreciação do Comitê de Ética em Pesquisa ou ao órgão correspondente e aprovados antes de sua execução. Durante cada período de internação os voluntários receberam uma única dose de cada uma das drogas, obedecendo os seguintes critérios: 5 mg por kilo de peso corporal de cada uma das formulações de ciclosporina diluídas em suco de laranja ou leite achocolatado; uma cápsula contendo 75 mg de ambroxol de cada uma das formulações em estudo acompanhada, por um copo de água fresca; uma cápsula de lincomicina contendo 500 mg de cada uma das formulações em estudo, acompanhada por um copo de água fresca. Os voluntários receberam os medicamentos de forma randomizada e alternada dentro de cada estudo, permanecendo internados por período de 36 horas para avaliação imediatamente anterior e acompanhamento médico após a administração do fármaco em estudo. Foram coletadas amostras de sangue de forma seriada por período de tempo de 12 horas (lincomicina), 24 horas (ciclosporina) e 48 horas (ambroxol). Cada uma das amostras foi processada de forma a ter tal concentração determinada para a droga em estudo. A metodologia adequada, de acordo com sensibilidade e especificidade, foi estabelecida para cada um dos estudos sendo que para dosagem de ciclosporina utilizamos o método de RIA para sangue total, o kit encontrado comercialmente possui Ac monoclonal altamente especifico, necessitando apenas uma extração com etanol e incubação com a solução de trabalho, com posterior contagem em contador de radiação gama. Para a determinação dos niveis de ambroxol foi utilizado o sistema de HPLC. Após centrifugação procedeu-se a uma extração com tampão tetraborato de sódio (pH 9.0), dietil éter e ácido clorídrico e, posteriormente, hidróxido de potássio. em coluna (Nucleosil C18 10µ 4.6 x 250 mm), com fluxo de 1.4 ml/min, tendo o eluente sido monitorado constantemente em comprimento de onda de 242 nm, o padrão interno foi obtido com bupivacaina. A determinação das concentrações plasmáticas de lincomicina foram obtidas através de ensaio biológico, utilizando meio de cultura BHI contaminado com bactéria (Sarcina lutea) até 0.4 AU em comprimento de onda de 550 nm, e posteriormente, diluido em agar para distribuição em placas de Petri. Após o resfriamento total e a formação do gel, foram realizados orifícios no meio e ali aplicadas as amostras de soro, previamente separada do sangue total, de cada paciente. O diâmetro do halo formado após incubação a 37°C por 24h foi medido e comparado com os de referência, obtendo-se assim os valores das concentrações de lincomicina. utilização de software adequado para cada ensaio clínico demonstrou claramente que: No estudo de farmacocinética comparada de duas formulações de ciclosporina em solução oral, há bioequivalência entre ambas. No estudo de farmacocinética comparada de duas formulações de lincomicina em cápsulas, não há bioequivalência entre ambas. No estudo de farmacocinética comparada de duas formulações de ambroxol em cápsulas, não há bioequivalência entre ambasThe aim of this thesis was to perform three different studies on clinical pharmacology (clinical assays). The determination of pharmacokinetic values were used in order to compare two formulations (each assay) of the same drug, from different sources. We used AUC[0-12(24) or (48)h], tmax and Cmax to refer if the drugs are bioequivalent or not. Ali the clinical protocols were approved by the Ethic$ Committee of the UNICAMP University Hospital and ali the subjects gave written informed consent. Three groups of healthy, male volunteers were used in order to obtain the information. Each group was composed for two sub-groups for the respective study. The drugs studied were: 1- cyclosporine oral solution (ciclospor from Biosintética versus sandimmun fron Sandoz) 5mg/kg; 2- lincomycin capsules (lincomicina from Abbott versus lincocin from Upjohn) 500mg, and 3- ambroxol capsule - slow release (ambril from Merck versus ambroxol from Euderma SPA) 75mg. The studies were conducted in an open randomized two period crossover fashion with fourteen .days washout period between doses. During each period, the volunteers were hospitalized at 8:00 p.m. having already had a norm_1 evening meal, and after an overnight fast they received at 7:00 a.m. a single dose equivalent to the correct study and according to the appropriated randomization code. After the capsule administration the volunteers were asked to drink 200ml of tap water. Blood samples were taken from suitable forearm vein before and at different intervals until 12h for lincomycin; 24h for cyclosporine and 48h for ambroxol. Each sample was treated according the specific methodology. Radioimmunoassay (RIA) was the method choused for the cyclosporine whole blood determinatio