Avaliação in vivo da degradação de proteses tubulares de poli (L-acido-latico) empregadas no reparo cirurgico do nervo ciatico de ratos

O reparo de nervos periféricos usando próteses tubulares é uma técnica alternativa que pode produzir resultados similares ou melhores que outras técnicas cirúrgicas utilizadas. Entretanto, sua eficiência depende essencialmente da biocompatibilidade e das propriedades estruturais do material do tubo. Nesse trabalho foi avaliado a degradação in vivo de tubos (lOmm) de poli(ácido lático) PLLA adicionado 10% de plastificante tri-etil-citrato. Dezesseis ratos machos da linhagem Wistar, foram submetidos a tubulização e divididos em quatro grupos experimentais (n=4) segundo tempos de sobrevida de 30, 90, 180 e 430 dias após a intervenção cirúrgica. Todas as cirurgias foram precedidas de anestesia profunda com pentobarbital sódico (60mg/kg). O nervo ciático esquerdo foi exposto e seccionado na porção média da coxa. Os cotos proximal e distal foram introduzidos no tubo, deixando-se uma distância de 5mm entre eles, sendo ancorados à parede deste através de um ponto de sutura epineural. Após os tempos de sobrevida de 30, 90, 180 e 430 dias, os animais foram novamente anestesiados e o nervos tubulizado e contralateral foram fixados in situ, por um período de 20 minutos, com uma solução de glutaraldeído 5% (tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), e removidos. A seguir foram deixados imersos na mesma solução fixadora por 24 horas, à temperatura de 4°C. Após esse período, os nervos processados foram então pós-fixados por um período de 2 horas em uma solução de tetróxido de ósmio 2% (tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), lavados e mantidos em acetato de uranila 2% (tampão fosfato 0,1 M; pH 7,4) por um período de 12 horas. Ao final os espécimes foram lavados, desidratados em gradiente de álcool etílico (30, 50, 70, 90 e 100%) e posteriormente incluídos em resina araldite. A partir dos fragmentos contendo a porção central do nervo regenerado e da porção anatomicamente correspondente dos nervos normais, foram obtidos cortes transversais semi-finos (1,0mm) que, após coloração com azul de toluidina (0,5%, tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), foram analisados à microscopia de luz. Após esta análise, as regiões de interesse de cada espécime foram selecionadas para a obtenção de cortes ultrafinos (500 Â). Estes foram recolhidos em telas de cobre (200 mesh), contrastados com citrato de chumbo (1%) e acetato de uranila (2%), observados e documentados ao microscópio eletrônico. Nossos resultados mostraram que 30 dias após a tubulização a regeneração do nervo ciático havia ocorrido. Na estrutura destes podiam se observar axônios mielínicos e amielínicos organizados em minifascículos. No espaço endoneural estavam presentes fibras colágenas bem como células semelhantes a fibroblastos e macrófagos. Externamente, havia se organizado uma bainha de tecido conjuntivo com uma organização típica de epineuro. Após os períodos de 90, 180 e 430 dias esses elementos do nervo foram amadurecendo, assumindo gradualmente uma ultra-estrutura similar à dos nervos normais. Após 30 dias, o implante apresentava sinais de degradação, mantendo, contudo sua estrutura tubular. A análise microscópica e ultra-estutural após 90, 180 e 430 dias mostrou que esta foi sendo gradativamente modificada pela invasão de células. A parede dos tubos foi sendo alterada pela formação de sulcos, que evoluíram para verdadeiros túneis, provocando assim a microfragmentação desta. Em nenhum dos tempos analisados foi constatada a ocorrência de processos inflamatórios intensos ou necrose nos tecidos circundantes que acusassem rejeição do material. Considerando que os tubos empregados permitiram o início e a evolução regular da regeneração do nervo à medida que estes foram sendo absorvidos, nossos achados mostram que o PLLA adicionado de 10% de tri-etil-citrato possui propriedades adequadas para a construção próteses tubulares destinados ao reparo cirúrgico de nervos periféricosThe peripheral nerves repair, by using tubular prosthesis, is an alternative technique which can produce similar results to or better than the other surgical techniques in use. Meanwhile, its efficiency depends essentialIy on the biocompatibility and the structural proprieties of the tube material. In the present work, the degradation of poly (L-lactic acid) PPLA tubes (10 mm) with the addition of 10% triethyl citrate plasticizer in vivo, has been appraised. Sixteen male mice of the Wistar lineage were submitted to tubulization and were divided into four experimental groups (n=4) according to overliving times of 30, 90, 180 and 430 days after the surgical intervention. All surgeries were preceded of deep anesthesia with sodium pentobarbital (60 mg/Kg). The left sciatic nerve was exposed and transected at the midthigh. The proximal and distal stumps were introduced into the tube, with 5mm distance left between them, and were sutured to its walI through an epineural suture stitch. After the overliving times of 30, 90, 180 and 430 days, the animals were anesthetized again and the tubulized and countralateral nerves were fixed in situ during 20 minutes with a 5% glutaraldehyde buffer solution and removed. Following, they were left immerged in the same solution for 24 hours, at 4°C temperature. After that period, the nerves were processed and then post fixed during 2 hours in a solution of osmium tetroxide 2% (phosphate buffer 0,1M; pH 7,4), washed and kept in uranyl acetate 2% (phosphate buffer 0,1 M; pH 7,4) for a period of 12 hours. Finally, the specimens were washed and dehydrated in ethyl alcohol gradient (30, 50, 70, 90 and 100%) and afterwards were included in araldite resin. From the fragments containing the central portion of the regenerated nerve and the portion of the normal nerves anatomicalIy corresponding to it, transverse semithin sections were obtained (1,0 mm), which after being stained with toluidine blue (0.5%, phosphate buffer 0,1M; pH 7.4), were analyzed at light microscopy. After that analysis, those regions of each specimen, for which there was interest, were selected for obtaining ultrathin sections (500 Â). They were colIected in copper web (200 mesh), and contrasted with lead citrate (1 %) and uranyl acetate (2%); they were observed and documented at the electronic microscope. Our results showed that 30 days after the tubulization, the sciatic nerves regeneration had occurred. In their structure, one could see axons myelin and anmyelin organized in mini-fascicles. The colIagen fibers were present in the endoneural space, as well as fibers similar to fibroblasts and macrophages. ExtemalIy, there had been organized a connective tissue sheath with an epineurium typical organization. After those periods o 90, 180 and 430 days, those nerve elements were ripening and assuming gradualIy an ultra-structure similar to the normal nerves. Thirty days after, the implantation showed degradation signals but it stilI maintained its tubular structure. The ultra-structural and microscopic analysis after 90, 180 and 430 days showed that the latter was under a gradual modification process by celIs invasion. The tube walIs were being changed by the formation of grooves, which developed into real tunnels, causing consequently its microfragmentation. In neither of the times which were analyzed, was it possible to verify either the occurrence of intense inflammatory processes or necrosis on the surrounding tissues which could reveal the material rejection. On considering that the tubes used alIowed the beginning and the regular evolution of the nerve regeneration while they were absorbed, our findings show that the PPLA with 10% of triethyl citrate addition holds the adequate properties for building tubular prostheses for the application of peripheral nerve surgical repai