Molecular study of the HGF/MET system in insulinomas

Os insulinomas são os tumores neuroendócrinos pancreáticos funcionantes mais frequentes, entretanto, os aspectos moleculares envolvidos em sua tumorigênese precisam ser melhor esclarecidos. As características morfológicas e histoquímicas dos insulinomas não conseguem predizer completamente seu comportamento biológico, apenas o fenótipo invasivo local e a presença de metástase são as formas confiáveis do diagnóstico maligno. A presente investigação teve por objetivos analisar a expressão gênica por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real e a expressão protéica por imuno-histoquímica dos componentes da via de sinalização do fator de crescimento hepatocítico (HGF) e seu receptor (c-MET) em 27 amostras de insulinomas, sendo: 16 tumores benignos grau 1 (G1), seis tumores benignos grau 2 (G2), dois insulinomas malignos grau 3 (G3) e três metástases hepáticas. Além disso, realizou-se a pesquisa de mutações somáticas no gene MET. Observou-se (1) o aumento da expressão dos genes HGF, MET e ST14 (codificante para a matriptase) e a baixa expressão do gene HAI-1 (codificante para a protease inibidora tipo-kunitz do tipo 1) nos insulinomas malignos e metástases quando comparados aos insulinomas benignos G1; (2) uma correlação positiva entre a expressão do mRNA do gene MET e o gene ST14 e índice proliferativo Ki-67, bem como uma correlação inversa entre a expressão do mRNA do gene HAI-1 e os genes MET, HGF, ST14 e o índice mitótico; (3) uma correlação positiva entre a expressão do gene ST14 e a expressão do mRNA do gene HGF; (4) maior expressão protéica de c-MET nos insulinomas malignos G3 em relação aos insulinomas G1/G2 e (5) ausência de mutações nos éxons 2, 10, 14, 16, 17 e 19 do gene MET. Concluiu-se que os genes HGF, MET, ST14 e HAI-1 estão diferencialmente expressos entre insulinomas malignos e benignos, o que pode ter implicações diagnósticas e terapêuticasIn an attempt to better understand the molecular processes involved in the tumourigenesis of islet beta-cells, the present study evaluated the expression of genes belonging to the hepatocyte growth factor and its receptor (HGF/MET) system, namely, MET, HGF; HGFAC and ST14 (encode HGF activator and matriptase, respectively, two serine proteases that catalyze conversion of pro-HGF to active HGF); and SPINT1 and SPINT2 (encode serine peptidase inhibitors Kunitz type 1 and type 2, respectively, two potent inhibitors of HGF activator and of matriptase) in 27 sporadic insulinomas; 16 grade 1 (G1), six grade 2 (G2), two grade 3 (G3) and three hepatic metastases. Quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction was employed to assess RNA expression of the target genes and immunohistochemical analysis was used to evaluate the expression of MET and SPINT1. Somatic mutations of MET gene were searched by direct sequencing of exons 2, 10, 14, 16, 17 and 19. Overexpression of MET was observed in grouped G3 insulinomas and metastases concomitantly with upregulation of the genes encoding HGF and matriptase and downregulation of SPINT1. Positive correlations were observed between MET RNA expression and Ki-67 proliferation index while a negative correlation was detected between SPINT1 expression and the mitotic index. No somatic mutations were found in MET gene. The final effect of the increased expression of HGF, its activator (matriptase) and its specific receptor (MET) together with a decreased expression of one potent inhibitor of matriptase (SPINT1) is probably a contribution to tumoural progression and malignancy in insulinoma