Comparative study of the VEGF system temporal distribution in the bovine and canine placenta

A família dos VEGFs é a principal responsável pela angiogênese aumentando a neovascularização e a permeabilidade da interface endometrial/placentária. O estudo comparativo da distribuição temporal do sistema VEGF na placenta de cães e de bovinos, que apresentam diferenças tanto na sua estrutura como na sua função, pode contribuir para esclarecer o papel deste sistema ao longo da gestação. Amostras da cinta placentária de cadelas (nos dias 20, 40 e 60 de gestação) foram coletadas assim como amostras de placentomas bovinos (dias 90, 150, 210 e 270 da gestação). As amostras foram congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas em -80ºC até serem homogeneizadas, ou fixadas em solução de formol tamponado e embebidas em paraplast usando os procedimentos convencionais. Foi realizado Western Blotting para a quantificação do sistema VEGF utilizando-se anticorpos específicos combinados com um sistema amplificador de quimio-luminescência: ECL®. A imuno-histoquímica para a localização do Flt-4 canino foi realizada de acordo com o método ABC, utilizando o Nova Red® como cromógeno. Na placenta bovina, o VEGF apresentou uma alta expressão no início da gestação seguida por queda que se manteve deste até o termo. O Flt-1, o KDR e o Flt-4 demonstraram uma alta expressão no início e no meio da gestação, e um declínio em sua expressão ao final da mesma. Na placenta canina, a proteína do VEGF e do Flt-1 apresentaram uma elevada expressão no início da gestação, a qual diminuiu na metade e assim se manteve até o final da gestação, enquanto o KDR demonstrou uma alta expressão no início e no meio da gestação, e um decréscimo em sua expressão próximo ao termo. A proteína do Flt-4 foi localizada nas regiões do labirinto placentário, do corion frouxo e do alantocorion e sua expressão variou nos diferentes compartimentos ao longo da gestação. A expressão similar do sistema VEGF e do Flt-4 em ambas as espécies estudadas sugere que estas proteínas apresentem funções similares tanto na placenta bovina como canina.The VEGF family is known to be responsible for the angiogenesis increasing blood vessels number and permeability in the endometrial/placentary interface. A comparative study of VEGF system temporal distribution in canine and bovine placentas, which present very well described differences in structure and function, will contribute to better define the role of this system along pregnancy. Samples from placental belt of pregnant bitches (on days 20, 40 and 60) were collected as well as bovine placentomes samples (from days 90, 150, 210, 270 of gestation). All samples were frozen in liquid nitrogen and stored at -80º C until processed, or fixed in buffered formalin solution and embedded in paraplast using conventional procedures. Western Blotting for VEGF system quantification was carried out using specific antibodies combined to an amplification quimio-luminescence system: ECL®. Immunohistochemistry for canine Flt-4 demonstration was performed according to the ABC method using NovaRed® as chromogen. In the bovine placenta, VEGF demonstrate a higher expression in early gestation, which decreased at mid-gestation and remained so until term. Flt-1, KDR and Flt-4 demonstrated a constant expression in early and mid-gestation, and a decrease in the end of pregnancy. In the dog placenta, VEGF and Flt-1 proteins show an increased expression in early gestation, and a decreased expression at mid and late gestation; while KDR demonstrated an increased expression at early and mid-gestation, and a decreased expression near term. Flt-4 protein is localized in placental labyrinth, chorion and allantochorion. Similar expressions of these proteins in both species, that present considerable differences in placenta structure and function, suggest that VEGF system and Flt-4 play similar roles in the bovine and canine placenta