Semi-quantitative gene expression of gonadotrophin receptors in dominant follicles of Nelore (Bos primigenius indicus) and Marchigiana (Bos primigenius taurus) prepubertal heifers and cows

Com o objetivo de semi-quantificar a expressão gênica para receptores de gonadotrofinas nas células de folículos dominantes em animais pré-púberes (bezerras) das raças Nelore e Marchigiana e novilhas púberes da raça Nelore, buscando diferenças que possibilitem a procura de respostas para a deficiência da competência de desenvolvimento dos oócitos de animais pré-púberes que permitam a utilização destes em programas de melhoramento genético animal, foram utilizados 8 animais, sendo três bezerras Nelore, três bezerras Marchigiana, com 7 meses de idade, e duas novilhas Nelore, com 25 meses de idade. Foi realizado acompanhamento da onda folicular através de ultra-sonografia por dois meses, e os animais foram abatidos no momento que o folículo dominante apresentava diâmetro máximo (8, 10 e 14 mm, respectivamente). Folículos dominantes foram dissecados e isolados, e foi feita extração de RNA total. Foram feitas quatro reações de síntese de cDNA a partir de cada amostra. Para análise da expressão gênica semi-quantitativa, foram realizadas reações de Duplex-PCR, utilizando-se dois oligonucleotídeos iniciadores em cada reação, um para gene controle, o gapdh, e outro para o gene alvo, receptor do hormônio folículo estimulante ou receptor do hormônio luteinizante. Estas reações foram realizadas em triplicata a partir de cada fonte de cDNA de cada amostra, e os produtos foram aplicados em gel de poliacrilamida, e fotografados. Os resultados foram obtidos a partir da razão entre a intensidade da banda do gene alvo e a intensidade da banda do gene controle, e os valores médios foram analisados estatisticamente. Foi encontrada menor expressão relativa do gene do receptor de LH em bezerras da raça Nelore quando comparadas com as novilhas da raça Nelore e as bezerras da raça Marchigiana. Foi detectada a presença de um splicing alternativo para o gene do LHr, que apresentou comportamento semelhante ao gene padrão. Não foi encontrada diferença significativa na expressão do gene do FSHr entre os grupos estudados. Os resultados sugerem uma maior importância do LH nos estágios finais de desenvolvimento folicular, demonstrado aqui pela menor expressão relativa de lhr nos folículos dominantes de bezerras Nelore em relação às novilhas púberes, que pode ser um dos motivos para o baixo potencial de desenvolvimento dos oócitos destes animais após a fertilização in vitroWith the objective to semiquantify the gene expression for gonadotrophins receptors in dominant follicles in Nelore and Marchigiana prepubertal heifers and Nelore adult cows, being searched differences that make possible the search of answers for the low developmental potential of oocytes from prepubertal heifers that allow the use of these in programs of animal genetic improvement, had been used 8 animals, being three Nelore heifers, three Marchigiana heifers, with 7 months of age, and two Nelore heifers, with 25 months of age. Accompaniment of the follicular wave was carried through daily ultrasonografic exams for two months, and the animals had been slaughtered at the moment that dominant follicle presented maximum diameter (8, 10 and 14 mm, respectively). Dominant follicles had been dissected and isolated, and extraction of total RNA was performed. Four reactions of synthesis of cDNA from each sample had been made. For analysis of the semi-quantitative gene expression, reactions of Duplex-PCR had been carried through, using themselves two initiating oligonucleotídeos in each reaction, one for housekeeping gene, gapdh, and another one for the target gene, fshr and lhr. These reactions had been carried through in third copy from each source of cDNA of each sample, and the products had been applied in poliacrilamida gel electrophoresis, and photographed. The results had been gotten from the reason enter the intensity of the band of the target gene and the intensity of the band of the housekeeping gene, and the average values had been analyzed in a statistical software. Lower relative expression of lhr in Nelore heifers was found when compared with the Nelore adult cows and the Marchigiana heifers. An alternative splicing for lhr was detected, that presented similar behavior to the gene standard. Significant difference in the expression of the gene of the FSHr between the studied groups was not found. The results suggest a importance of the LH in the final periods of follicular development, demonstrated for the lower relative expression of lhr in the dominant follicles of Nelore heifers in relation to the adult cows in this study, that can after be the one of the reasons for the low developmental capacity of oocytes of these animals after in vitro fertilizatio