Estudo de associação da AluyHG e InDel14pb em pacientes com psoríase do estado de Santa Catarina

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.A psoríase é uma doença sistêmica crônica, de caráter imunoinflamatório e não contagioso, que pode acometer a pele, as unhas e as articulações. No Brasil, estima-se que sua prevalência seja de 1,3%. O Complexo de Histocompatibilidade Principal (MHC) é uma das regiões mais polimórficas do genoma humano, caracterizado por uma alta densidade de genes e, pelo menos a metade, tem funções no sistema imune, sendo que grande parte foi associado com mais de 100 patologias. Além disso, nele existe um forte desequilíbrio de ligação entre alelos de locus específicos e alguns genes. Para este trabalho foram escolhidos dois polimorfismos localizados em regiões do MHC: o polimorfismo do tipo Alu, AluyHG; e o InDel14pb de um gene imunorregulador, HLA-G, que tem sido associado com o controle da produção de HLA-G, modulando a estabilidade do mRNA. A partir disso, o objetivo deste estudo foi genotipar os polimorfismos citados, em 100 pacientes e 100 controles (pareados por idade e gênero) e verificar a influência desses polimorfismos na patogênese da doença. Para isso, foi realizado um levantamento de dados epidemiológicos relacionados ao desenvolvimento e gravidade da doença (presença de sintomas de artrite psoriásica, história familial para a psoríase e idade de manifestação dos primeiros sintomas da doença) e estes foram testados como fatores de risco. O DNA foi extraído de sangue total e a genotipagem feita por PCR e visualizada em gel de agarose 1%, no qual o polimorfismo AluyHG foi identificado. O InDel14pb foi genotipado em um trabalho prévio do nosso grupo, através de PCR e visualização em PAGE 7% corado com nitrato de prata. Do total de pacientes, 57 eram mulheres, 44 indivíduos apresentaram casos na família, 43 manifestaram a doença antes dos 30 anos e 16 manifestaram artrite psoriásica. Foram realizados cálculos das frequências alélicas e genotípicas, análises de associações e a inferência de haplótipos. Após as análises foram encontradas associações, para aqueles que apresentaram sintomas antes dos 30 anos de idade o genótipo AluyHG*In*Del (OR=0,418; p=0,040), assim como o alelo *Del (OR=2,929; p=0,013) e o genótipo *Del*Del (OR=4,398; p=0,009) do InDel14pb para pacientes que apresentam sintomas de artrite psoriásica. O teste de desequilíbrio de ligação entre os dois loci indicou que eles estão em LD. Assim, estudos de expressão da molécula devem ser feitos de forma a esclarecer melhor como se dá o controle da expressão da molécula com relação aos polimorfismos estudados. Além disso, a análise de haplótipos entre esse dois polimorfismos deve ser melhor explorada, pois indica que esta região deva ser melhor caracterizada em estudos caso-controle em diferentes populações. De modo que se possa identificar loci marcadores que levarão a diminuição do esforço e dos custos de genotipagem desta região em estudos de associação com doenças, como psoríase, e auxiliar no desenvolvimento de técnicas de diagnóstico.Psoriasis is a chronic systemic disease, with an immunoinflammatory character and not contagious, which can affect the skin, nails and joints. In Brazil, it is estimated that the prevalence of this pathology is 1.3%. The major histocompatibility complex (MHC) is one of the most polymorphic regions on the human genome, characterized by a high density of genes where at least half of them, has functions in the immune system, much of which was associated with more than 100 pathologies. Furthermore, MHC showed up in strong linkage disequilibrium between alleles of specific loci and some other genes. For this study, were chosen two polymorphisms in regions of the MHC: Alu, AluyHG polymorphism; and the InDel14bp of an immunoregulatory gene, known as HLA-G, which has been associated with the control of HLA-G production by modulating the stability of mRNA. Therefore, the aim of this study were to infer the genotype of the polymorphisms, in 200 samples (100 cases and 100 controls matched for age/gender), and determine the influence of these polymorphisms in the pathogenesis of psoriasis. We conducted a survey of epidemiological data related to the development and severity of the disease such as the presence of symptoms of psoriatic arthritis; family history for psoriasis and age at onset of the first symptoms were tested for risk factors. The DNA samples were extracted from whole blood, and the genotyping was carried out by PCR, whereas visualization were made by 1% agarose gel to identify the AluyHG polymorphism. The InDel14pb was genotyped in a previous work of our group by PCR and visualized in a 7% PAGE stained with silver nitrate. Of all patients, 57 were women, 44 individuals had cases in the family, 43 manifested the disease before age 30 and 16 expressed psoriatic arthritis. Calculations of allele and genotype frequencies were performed, as well as association analysis and haplotype inference. After the analyzes, results showed that associations were found for those who had symptoms before 30 years of age, relating the genotype AluyHG*In*Del (OR = 0.418, p = 0.040), as well as the *Del allele (OR = 2.929, p = 0.013 ) and genotype *Del*Del (OR = 4.398, p = 0.009) for the InDel14pb patients presenting symptoms of psoriatic arthritis. Linkage disequilibrium test between the two loci indicated that they are in LD. Thus, molecule expression studies must be made in order to further clarify how these polymorphism could be related with the control of the molecule expression. The haplotype analysis between these two polymorphisms should also be explored, as it indicates that this region must be better characterized in case-control studies in different populations, so that they can identify loci markers that will lead to reduced genotyping effort and cost of this region in association studies with diseases such as psoriasis, and aid in the development of moderns diagnostic techniques