Determinação fenotípica e genotípica de beta-lactamases de espetro estendido em Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e enterobacter spp. de pacientes internados no Hospital Universitário Professor Polydoro Ernani de São Thiago (HU/UFSC)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014.As enterobactérias são patógenos oportunistas responsáveis por cerca de 70% das infecções urinárias e 50% das septicemias. Além disso, têm se tornado um desafio no tratamento de doenças infecciosas, principalmente em hospitais, devido à facilidade com que adquirem genes de resistência. A produção de ß-lactamases de espectro estendido ESBL) é o mecanismo de resistência mais importante das enterobactérias. Dentre as diversas ESBLs descritas na literatura, as do tipo TEM, SHV e CTX-M são as mais disseminadas mundialmente. O objetivo deste estudo foi avaliar por meio de métodos fenotípicos e genotípicos, o perfil de resistência de estirpes de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Enterobacter spp. produtoras de ESBL isoladas de pacientes internados no Hospital Universitário Professor Polydoro Ernani de San Thiago. Foram identificadas 145 amostras isoladas de sangue, urina, secreção traqueal e de ferida cirúrgica de pacientes internados. Foram realizados testes de suscetibilidade aos antimicrobianos e detecção fenotípica de ESBL pelo Teste de Disco Aproximação. A pesquisa genotípica de ESBLs foi feita para os genes blaTEM, blaSHV e blaCTX-M por duas reações de PCR multiplex. E a identidade dos produtos amplificados de cada gene foi confirmada por sequenciamento. A avaliação da similaridade genética entre os isolados foi realizada por meio de RAPD-PCR. Do total de isolados, foram identificados 66,9% de E. coli, 25,5% de K. pneumoniae, 4,1% de Enterobacter cloacae e 3,4% de Enterobacter aerogenes. Além disso, 73% das amostras de urina foram de E. coli, 22% de K. pneumoniae, 1,7% de E. cloacae 3,4% de E. aerogenes. Das amostras de sangue 57,1% foram de E. coli, 28,6% de K. pneumoniae, 7,1% de E. cloacae e 7,1% de E. aerogenes. E de ferida, 25% dos isolados foram de E. coli, 50% de K. pneumoniae e 25% de E. cloacae. A prevalência de ESBL nos isolados foi de 27,6%, sendo que 32,5% dos isolados foram de E. coli, 60 % de K. pneumoniae e 7,5% de E. cloacae. O gene blaTEM foi detectado em 82,5% (33) das amostras, blaSHV 60% (24) dos isolados e blaCTX-M em 42,5% (17), 17,5% (7) e 12,5% (5) para CTX-M Grupo 1, Grupo 2 e Grupo 9, respectivamente. Além disso, 77% dos isolados ESBL positivos expressavam mais de uma enzima. O sequenciamento confirmou a identidade de todos os produtos amplificados. Na genotipagem por RAPD, as amostras de K. pneumoniae foram mais semelhantes entre si que os isolados de E. coli, e duas das três estipes de E. clocae possuíam o mesmo perfil eletroforético. Entretanto, apesar de algumas diferenças pontuais, a maioria dos isolados foram classificadospelo menos como "possivelmente relacionados" segundo os critérios de Tenover. Portanto, com os resultados obtidos nesse estudo, sugere-se a existência de uma estirpe de K. pneumoniae endêmica no HU/UFSC, disseminada por todos os setores, situação semelhante à observada com as estirpes de E. coli.<br>Abstract : Enterobacteriaceae are opportunistic pathogens responsible for approximately 70% of urinary infections and 50% of septicemia. Furthermore, it has become a challenge in the treatment of infectious diseases, especially in hospitals, due to the easiness with which acquire resistance genes. The production of Extended Spectrum ß-lactamase (ESBL) is the most important mechanism of resistance of Enterobacteriaceae. Among the several ESBLs described in the literature, ESBL like TEM, SHV and CTX-M are the most widespread worldwide. The aim of this study was to evaluate by phenotypic and genotypic methods, the resistance profile of strains of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. ESBL-producing isolates from inpatients at the University Hospital Professor Polydoro Ernani San Thiago. 145 strains isolated from blood, urine, tracheal aspirates and wound inpatients were identified. Antimicrobial susceptibility test and phenotypic ESBL detection by Disk Approximation Test were performed. ESBLs Genotypic survey were taken for blaTEM, blaSHV and blaCTX-M genes by two multiplex PCR reactions. And the identity of the amplified product of each gene was confirmed by sequencing. The genetic similarity of isolates was performed by RAPD-PCR. The total isolates, 66.9% were E. coli, 25.5% were K. pneumoniae, 4.1% were Enterobacter cloacae and 3.4% were Enterobacter aerogenes. In addition, 73% of the urine samples were E. coli, 22% were K. pneumoniae, 1.7% were E. cloacae and 3.4% were E. aerogenes. Blood samples were 57.1% of E. coli, 28.6% of K. pneumoniae 7.1% of E. cloacae and 7.1% of E. aerogenes. And wound, 25% of the isolates were E. coli, 50% were K. pneumoniae and 25% were E. cloacae. The ESBL prevalence in isolates was 27.6% and 32.5% of these were E. coli, 60% were K. pneumoniae and 7.5% were E. cloacae. The blaTEM gene in 82.5% (33) samples, blaSHV was detected in 60% (24) isolates and blaCTX-M was detected in 42.5% (17) 17.5% (7) and 12.5% (5) for CTX-M group 1, group 2 and group 9, respectively. Additionally, 77% of ESBL-positive isolates expressing more than one enzyme type. The sequencing confirmed the identity of all PCR products. RAPD genotyping, K. pneumoniae samples were more similar to each otherthan E. coli isolates, and two of the three E. clocae stems had the same electrophoretic profile. However, despite some slight differences, most isolates were classified at least as "possibly related" according to the criteria of Tenover. Therefore, the results obtained in this study suggest the existence of a strain of K. pneumoniae endemic in HU / UFSC, spread across all sectors, similar to that observed with strains of E. coli situation