Detecção do HPV e da Chlamydia trachomatis em amostras de cérvice uterina de mulheres da cidade de São Miguel do Oeste

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014.O Papilomavirus Humano (HPV) e Chlamydia trachomatis (CT) são responsáveis pelas Doenças Sexualmente transmissíveis, de origem viral e bacteriana, mais prevalentes na população sexualmente ativa. O HPV desempenha papel central na etiologia de praticamente todos os casos de câncer cervical, entretanto, admite-se que outros fatores possam, conjuntamente com o vírus, modular o risco de transição da infecção cervical para a malignidade. Além do HPV, diversos estudos estão considerando a CT como um cofator no desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais cervicais e outras alterações celulares significativas em mulheres com histórico de infecção por HPV. Diante disto, o objetivo deste estudo foi estimar a prevalência de HPV, CT e a coinfecção HPV/CT por métodos moleculares (PCR-multiplex, microarray, RFLP e sequenciamento) em amostras cervicais de mulheres atendidas no Sistema Único de Saúde da cidade de São Miguel do Oeste/SC. Trata-se de um estudo transversal, cujo desfecho é a positividade ao HPV e à CT. Durante o período de novembro de 2011 a março de 2013, foram coletadas amostras cervicais de 325 mulheres sexualmente ativas e que procuraram o serviço de saúde para rastreio rotineiro do câncer cervical. As amostras foram submetidas à PCR-multiplex padronizada neste estudo, utilizando os conjuntos de iniciadores PGMY0911, CTP1/CTP2 e PCO3/PCO4. As amostras positivas para HPV foram submetidas à técnica de PCR-RFLP (Polimorfismo dos Fragmentos de Restrição), microarray e sequenciamento. A prevalência do DNA de HPV foi de 24,6% na amostra estudada. Já em relação à CT a prevalência foi de 11,1% e 4,6% da amostragem total, apresentando coinfecção para HPV/CT. Observou-se associação do HPV com as seguintes variáveis: citologia (p<0,001), idade (p=0,001), idade de início da atividade sexual (p= 0,008) e o uso de anticoncepcional oral (p=0,048). Encontrou-se associação entre a CT e o número de parceiros ao longo da vida (p=0,048). Observou-se associação entre as variáveis: idade (p=0,006) e uso de anticoncepcional oral (p=0,011) com a presença da coinfecção HPV/CT. A genotipagem das amostras pelas três metodologias (RFLP, sequenciamento e microarray) identificou 32 genótipos diferentes de HPV, dentre eles o 16, 39, 53, 68 e 56 foram os mais prevalentes. A PCR-multiplex, padronizada neste estudo, mostrou-se útil no rastreio simultâneo do HPV e da CT, assim como a metodologia PCR-RFLP apresentou um bom desempenho para a identificação concomitante de até dois tipos deHPV em uma mesma amostra. O sequenciamento mostrou-se uma excelente ferramenta para a identificação de infecções por um único tipo viral, enquanto o Papillocheck® foi o método capaz de detectar amostras polinfectadas. A PCR-multiplex associada a PCR-RFLP pode ser utilizada como um método de rastreio e identificação de genótipos de HPV em infecções simples ou como discriminatório entre infecções simples ou múltiplas, enquanto que a análise por uma metodologia com maior poder discriminatório, pode ser utilizada como método complementar, principalmente em locais com poucos recursos financeiros. Embora a sensibilidade do RFLP tenha sido inferior ao desejável para a maioria dos tipos virais, o alto valor preditivo negativo desta metodologia define sua utilidade no rastreio do HPV, visto que resultados negativos em metodologias com elevado valor preditivo negativo são confiáveis.<br>Abstract : The Human Papillomavirus (HPV) and Chlamydia trachomatis (CT) are responsible for the most prevalent sexually transmitted disease caused by virus and bacteria. HPV has a central role in the etiology of virtually all cervical cancers; however it is believed that other factors may also modulate the risk of a cervical infection progress to malignancy. Many studies consider CT as a cofactor in cervical intraepithelial neoplasia development as well other significant cell abnormalities in women with history of HPV infection. The aim of this study was to estimate the prevalence of HPV, CT and HPV/CT coinfection by molecular methods in cervical samples from women attending public health services at São Miguel do Oeste/SC. This is a cross-sectional study and the outcomes are positive results to HPV, CT or HPV/CT coinfection. A total of 325 cervical samples were collect from sexually active women seeking cervical cancer screening from November 2011 to March 2013. HPV, CT and coinfections were detected by PCR-multiplex using the consensus primers, PGMY0911, CTP1/CTP2 e PCO3/PCO4. HPV-positive samples were typed by PCR-RFLP, microarray and sequencing. The HPV, CT and HPV/CT prevalence were 24.6%, 11.1% and 4.6% respectively. Statistics associations were observed for HPV with the variables cytology (p