Avaliação da transcrição diferencial de genes alvo em Crassostrea brasiliana expostas in situ no manguezal do Itacorubi, Florianópolis, SC

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2013.Ambientes costeiros marinhos, especialmente sistemas semi-fechados como manguezais, são altamente susceptíveis à contaminação causada pelo desenvolvimento urbano e industrial. Organismos sentinela têm sido propostos como bioindicadores de contaminação aquática, através da avaliação de alterações biológicas desencadeadas por xenobióticos presentes no ambiente, as quais expressam a exposição aos mesmos e/ou seus efeitos. Crassostrea brasiliana é uma espécie de ostra eurialina que habita áreas de manguezal ao longo de toda a costa brasileira. O objetivo do presente estudo foi investigar a transcrição diferencial de genes selecionados como alvo em C. brasiliana e avaliar seu potencial como biomarcadores moleculares relacionados ao estresse causado pela contaminação do Manguezal do Itacorubi, em Florianópolis, SC. Situado dentro do perímetro urbano do município esta área vem sofrendo constante pressão antrópica, principalmente pelo aporte de esgoto sanitário não-tratado. Ostras provenientes de um cultivo e aclimatadas por uma semana em laboratório foram transplantadas para duas áreas. Uma localizada no manguezal do Itacorubi, área densamente povoada, e outra localizada no manguezal do Ratones, área pristina, que foi considerada como local de referência (RAT). No manguezal do Itacorubi, as ostras foram transplantadas para dois pontos distintos (ITAI e ITAII). Foram realizadas duas exposições, uma no início do verão 2011/2012 (EXP1) e outra após a temporada de verão (EXP2). Exemplares coletados em 24h e 96h após a exposição in situ, tiveram suas brânquias dissecadas, o mRNA foi extraído e por transcrição reversa foi obtido o cDNA. Através do uso de PCR em tempo real (qPCR) foram quantificados os níveis de transcritos de genes alvo nas ostras expostas em comparação ao grupo referência. Com base no transcriptoma da C. brasiliana, previamente realizado pelo nosso grupo de pesquisa, foram selecionados, como genes alvo para validação neste estudo de campo, os genes Citocromo P450 (CYP2AU1 e CYP2B-like), Fatty Acid Binding Protein (FABP), Sulfotransferase1C1 (SULT), Glutationa S-transferases (GSTO e GSTmicrossomal), Glutationa Peroxidase (GPx), Catalase (CAT) e Superóxido Dismutase (SOD), os quais estão associados, principalmente, às respostas de defesa contra o estresse oxidativo e com o processo de biotranformação. O mesmo padrão de transcrição foi constatado nos dois experimentos no tempo de exposição de 24h para os genes FABP, SULT, CYP2AU1 e CYP2B-like, assim como para FABP no tempo de 96h. A transcrição de outros genes, como CAT em 24h e CYP2AU1, CYP2B, GSTO e GSTmicrossomal em 96h, mostraram diferenças nos níveis de transcritos entre os grupos expostos e o grupo referência, porém não apresentaram o mesmo padrão de transcrição na análise comparativa entre as duas exposições in situ realizadas. Os níveis mais elevados de transcritos de FABP, SULT e CYPs (CYP2B1-like e CYP2AU1) em ostras do mangue, C. brasiliana, observados para ITAI em 24h, nas duas exposições in situ, permitem sugerir a validação desses genes como biomarcadores de contaminação ambiental por esgoto sanitário