Atividade moduladora do extrato hidroalcoólico de própolis catarinense na formação de vasos sanguíneos

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013.Inúmeros estudos relacionados à formação de vasos sanguíneos abordam ocorrência de atividade moduladora exercida por produtos naturais no microambiente das células endoteliais. A própolis vem sendo investigada como uma candidata à modulação angiogênica. Entre seus constituintes químicos, encontram-se ácidos fenólicos, ésteres, flavonóides, terpenos, beta-esteróides, aldeídos aromáticos, sesquiterpenos e estilbeno-terpenos, entre outros grupos, sendo que sua composição pode variar de acordo com a fonte botânica do exsudato coletado, bem como das condições ambientais. O extrato hidroalcoólico de própolis coletado no outono/2010 no planalto serrano (município de São Joaquim) teve a sua ação investigada na viabilidade celular, na capacidade de proliferação, na função migratória e na tubulogênese de células endoteliais de veia umbilical humana. Esse extrato apresentou teores elevados de ácidos fenólicos (ácido gálico, ácido protocatecuico, ácido clorogênico e seus ésteres como o ácido isoclorogênico A e ácido isoclorogênico C) e do flavonoide quercetina. O extrato (100 - 200 µg/ml) produziu citotoxicidade e diminuição dos mecanismos de proliferação, migração e tubulogênese. Ele também foi capaz de reverter o efeito proliferativo do fator de crescimento vascular endotelial nas células endoteliais. A atividade da metaloproteinase-9 não foi alterada com 200 µg/ml do extrato. Porém, esta mesma concentração inibiu a atividade proliferativa da proteína quinase C e promoveu um efeito aditivo na inibição do efeito proliferativo da enzima cicloxigenase 1 e 2. Além disso, a administração do composto puro quercetina isoladamente (40 µM) ou em associação com o extrato (200 µg/ml), inibiu a proliferação celular. No ensaio de morte celular, evidenciou-se uma tendência à ação pró-necrótica do extrato. Quando o extrato de própolis foi administrado, in vivo, em membranas extra-embrionárias de Gallus domesticus, observou-se significativa inibição dos processos de vasculogênese e angiogênese. Os resultados desses ensaios in vitro e in vivo evidenciam o efeito modulador do extrato hidroalcoólico de própolis outonal catarinense na formação de vasos sanguíneos indicando aplicação em condições patológicas caracterizadas e sustentadas por uma angiogênese excessiva.<br>Abstract : A number of studies regarding the formation of blood vessels approach the occurrence of modulatory activity exerted by natural products in the microenvironment of endothelial cells. Propolis has been investigated as a candidate for angiogenic modulation. Among the chemical constituents of that complex matrix are phenolic acids, esters, flavonoids, terpenes, beta-steroids, aromatic aldehydes, terpenes, sesquiterpenes, stilbenes and others groups, and its composition may vary according to the botanical source of exudates collected as well as, the environmental conditions. Hydroalcoholic propolis extract collected at autumn/2010 in Santa Catarina State (São Joaquim county) was investigated regarding its action on the cell viability, proliferation and migration, and also on the tubulogenesis of human umbilical vein endothelial cells. This extract has showed a high content of phenolic acids (gallic acid, protocatechuic acid, chlorogenic acid and its ester derivates isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid C) and the flavonoid quercetin. Propolis extract displayed cytotoxic activity (100 - 200 µg/ml) and decreased the mechanisms of proliferation, cell migration, and vascular tubulogenesis. The propolis extract was also able in to reverse the proliferative effects of vascular endothelial growth factor on endothelial cells. Activity of metalloproteinase-9 was not influenced by 200 µg/ml extract. However, this treatment inhibited the proliferative activity of protein kinase C and promoted an additive effect in the inhibition of proliferative effect carried by cyclooxygenase 1 and 2. Moreover, the pure compound quercetin when administered alone (40 µM) or in association with the extract inhibited the cell proliferation. Cell death assay showed a tendency a pro-necrotic action by the extract under study. When administered in vivo in extra-embryonic membranes of Gallus domesticus, the propolis extract promoted a significant inhibition of the vasculogenesis and angiogenesis. Taken together, the in vitro and in vivo findings evidence the modulatory effects of propolis extract studied on the blood vessels formation, and suggest application in morbidities characterized and sustained by excessive angiogenesis