Detecção de soja geneticamente modificada em alimentos por reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando diferentes iniciadores com DNA extraído por três protocolos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-graduação em Ciência dos AlimentosA introdução de organismos geneticamente modificados (OGMs) no comércio levou a adoção de legislação que impõe a rotulagem dos alimentos GMs. No Brasil, o decreto Nº 4680 de 24 de abril de 2003 do governo federal estabelece rotulagem para alimentos que contenham mais de 1% de OGMs, sendo necessário implementar medidas que garantam que o mesmo seja cumprido. Atualmente, a detecção de OGMs está principalmente baseada na presença de DNA GM através da reação em cadeia da polimerase (PCR). Diversos fatores influenciam o desempenho da reação de PCR, destacando-se o desenho de iniciadores e a qualidade do DNA extraído. Na primeira etapa deste trabalho, foram preparadas amostras contendo 0%, 0,001%, 0,01%, 0,1%, 1% e 10% de soja Roundup ReadyTM (RR) e a detecção de soja RR foi avaliada pela amplificação com três grupos de iniciadores a partir de DNA de soja RR extraído com três diferentes protocolos derivados do método CTAB. Os DNAs extraídos foram submetidos a PCR com os grupos de iniciadores: GMO5/GMO9 e GMO/7GMO8, RR1/RR2 e RR3/RR4; CAM/CTP, este último confirmado por digestão com BglII. As amostras extraídas com o Protocolo 3 apresentaram maior sensibilidade e as extraídas com Protocolo 1, a menor. A PCR com CAM/CTP apresentou alta sensibilidade para DNA extraído com Protocolo 3, porém não pôde ser confirmada para os demais. Os iniciadores GMO foram considerados mais adequados por apresentar boa sensibilidade (0,01% RR com Protocolo 3), além de obter perfil com menor número de bandas inespecíficas e maior repetibilidade de resultados, sendo utilizado na segunda etapa deste trabalho para detectar soja RR em seis amostras de farinha de soja e seis de fórmula infantil contendo isolado protéico de soja, com DNA extraído com Protocolo 3. Quatro das amostras de farinha apresentaram resultado positivo e nenhuma de fórmula infantil. O protocolo nested PCR com iniciadores GMO e DNA extraído pelo protocolo 3 mostrou-se adequado para a detecção de soja RR em amostras de farinha de soja e fórmula infantil. Due to the market introduction in Brazil of the genetically modified (GM) crop Roundup ReadyTM (RR) soybean, the ability to detect GM crops has became a legal necessity. The Brazilian regulatory agency (decree nº 4680, 04/24/2003) requires a labeling limit of 1% genetically modified organisms (GMO) in foodstuffs. The detection of GMO is mainly based on GM DNA presence through PCR. Several factors influence the performance of PCR, standing out the designed of primers and the extracted DNA quality. In this study, the RR soybean detection was evaluated by the amplification with three primer sets of PCR from soybean DNA extracted with three different extraction protocols. Samples containing 0%, 0,001%, 0,01%, 0,1%, 1% and 10% of RR soybean were prepared and extracted from three CTAB derived protocols. Extracted DNA was submitted to PCR with three set of primers: GMO5/GMO9 and GMO/7GMO8; RR1/RR2 and RR3/RR4; CAM/CTP, this last one confirmed by digestion with BglII. The extracted DNA samples using the Protocol 3 showed the best sensibility and the extracted ones using Protocol 1 the worst. PCR with CAM/CTP showed high sensibility for DNA extracted using Protocol 3, however it could not be confirmed for the other primers. The primers GMO were considered more appropriate for presenting good sensibility (0,01% RR with 3 Protocol), besides obtaining profile with less non-specific bands and the best repeatability of results, being used to detect RR soybean in 6 flour samples and 6 samples of infantil formula containing soybean isolated protein, extracted using Protocol 3. Four of flour soy samples showed positive result and none of infantil formula. Nested PCR using GMO primers and DNA extracted using Protocol 3 was appropriate for RR soybean detection in flour soy samples and infant formula samples