Estudo dos efeitos anti-inflamatório e antioxidante do micofenolato de mofetila no modelo de pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011Introdução: O micofenolato de mofetila (MMF) é um fármaco imunossupressor utilizado atualmente na clínica na rejeição de transplantes de órgãos e em algumas doenças auto-imunes, como na uveite e na glomerulonefrite. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e antioxidante do MMF administrado por via oral, na primeira (4 h) e segunda (48 h) fases da resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), no modelo da pleurisia, em camundongos. Materiais e Métodos: Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos suíços de 1 mês de idade. O modelo experimental utilizado foi o da pleurisia induzida pela Cg, segundo metodologia descrita por Saleh et al. (1996). A inflamação foi avaliada estudando-se alguns parâmetros da resposta inflamatória segundo metodologias já padronizadas e descritas na literatura (leucócitos e a exsudação), atividade das enzimas: mieloperoxidase (MPO), adenosina deaminase (ADA), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), as concentrações de: nitrito/nitrato (NOx) e das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Neste protocolo, também foram estudadas a influência do MMF sobre as concentrações das proteínas e sobre a transcrição do mRNA para o fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), interleucina-1 beta (IL-1?), fator de crescimento endotelial vascular alfa (VEGF-?), e interleucina 17A (IL-17A), utilizando-se as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Para a pesquisa da enzima óxido nítrico sintase induzida (ONSi) também foi utilizada a técnica de RT-PCR. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h e 48 h após a indução da pleurisia. Como fármacos de referência anti-inflamatória foram utilizados: a dexametasona (Dex, i.p.) e o ibuprofeno (Ibu, v.o.). Em alguns experimentos para avaliar a exsudação, os animais foram tratados 10 minutos antes da aplicação da Cg, com solução de azul de Evans (25 mg/kg, 0,2 mL, i.o.). Para a análise estatística dos resultados foi utilizado o teste paramétrico ANOVA complementado, quando necessário, pelo teste de Dunnett, teste t de Student e teste de correlação de Pearson. Diferençcas com P < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: Em ambas as fases (4 h e 48 h) da resposta inflamatória induzida pela Cg, o MMF na dose de 100 mg/kg administrado por via oral (v.o.) inibiu os leucócitos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), as atividades de: MPO (P < 0,05), ADA (P < 0,01), CAT (P < 0,05), SOD (P < 0,05), GPx (P < 0,01) e GST (P < 0.01), as concentrações de: nitrito/nitrato (ONx) (P < 0,01) e TBARS (P < 0,05). Além disso, o fármaco também inibiu aumento das concentrações e a transcrição do mRNA de: TNF-? (P < 0,01), IL-1? (P < 0,01), VEGF-? (P < 0,01) e IL-17A (P < 0,01), bem como a transcrição da enzima ONSi (P < 0,01). Conclusão: Os resultados demonstraram que o MMF possui importante efeito anti-inflamatório e antioxidante, inibindo mediadores e enzimas que participam da resposta inflamatória no modelo da pleurisia em camundongos. Este efeito parece ocorrer também em nível pré-transcripcional uma vez que o MMF foi capaz de inibir não somente as concentrações de citocinas formadas, mas também a transcrição do mRNA para estas proteínas