Estudo do envolvimento iônico e de proteínas cinases no mecanismo de ação da 1-a,25(OH)2 vitamina D3, no influxo de cálcio em células de Sertoli e em testículos de ratos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010Tendo em mente que a 1,25D3, produto final do metabolismo da vitamina D3 é essencial para a integridade do sistema reprodutor masculino, e que, a homeostase do Ca+2 desempenha papel chave em muitos processos envolvidos na espermatogênese, avaliamos o efeito em nível membranar da 1,25D3 sobre o metabolismo do Ca+2 em testículo inteiro e célula de Sertoli de ratos imaturos. Foi demonstrado que em após 60 minutos de pré-incubação com o hormônio, não hove variação da captação basal de 45Ca+2 nos tempos de incubação de 30, 60, 150, 300 e 600 segundos. No tempo de incubação de 60 segundos, foi verificado que a 1,25D3 tem a capacidade de aumentar a captação de 45Ca+2 do meio extracelular em diferentes doses em ambos modelos experimentais, sendo este evento independente da ação genômica. Em testículos, observou-se que doses entre 10-15M e 10-9M foram eficazes em aumentar a captação de 45Ca+2, sendo o maior efeito evidenciado da dose de 10-10M (106%). Utilizando esta dose, foi demonstrado que os canais de CCDV do tipo L e T são as principais vias de entrada do íon nas células testiculares, e que há necessidade da manutenção das correntes de K+ e Cl- para que ocorra este evento. Em células de Sertoli também não foi verificada a variação da captação basal de 45Ca+2. Neste sistema, foi verificado que no tempo de 60 segundos de incubação, o hormônio foi capaz de elevar a captação de 45Ca+2 entre as doses de 10-12M e 10-8 M, onde a dose de 10-12 M aumentou em torno de140% a capatação do íon. Já a dose de 10-10 M elevou em 89% o influxo do íon. Desta forma, utilizando a dose de 10-10 M, verificamos que as células de Sertoli comportam- se assim como os testículos: há necessitadade da ativação dos CCDV-L e T para a entrada do Ca+2 assim como das correntes de K+ e Cl-. Também foi verificado que em células de Sertoli há necessidade da ativação das proteínas PKC e p38MAPK para a capatação de Ca+2 estimulada pela 1,25D3. Alé, disso, as proteínas PI3K e ERK1/2 também estão em parte envolvidas neste processo. Por fim, avaliamos que a integridade dos microtúbulos e a atividade dos canais ClC3 faz-se necessária para que ocorra a entrada do íon nas células de Sertoli, sendo esta elevação do íon necessária para que ocorra o processo de secreção celular já demosntrada anteriormente pela 1,25D3