Atividades antimicrobiana, antiparasitária e hemolítica de peptídeos antimicrobianos isolados de animais aquáticos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Prtograma de Pós-Graduação em BiotecnologiaPeptídeos ou proteínas antimicrobianas (PAM) são componentes do sistema imune inato, presentes na maioria dos seres vivos, que vêm despertando um crescente interesse, uma vez que podem apresentar uma atividade antimicrobiana potente contra um amplo espectro de microrganismos, sendo usualmente atóxicos para células de mamíferos. No presente trabalho, foi investigada a atividade antibacteriana, antifúngica, antiparasitária e hemolítica, assim como a estabilidade em diferentes salinidades, de diferentes peptídeos isolados de animais aquáticos: taquiplesina (Taq), do limulídeo Tachypleus tridentatus, magainina (Mag), do anfíbio Xenopus laevis, clavanina (Clav), do tunicado Styela clava, peneidina (Pen), do camarão Litopenaeus vannamei, mitilina (Mit) do mexilhão Mytilus edulis e o fator anti-lipopolissacarídeo (ALF) do camarão Penaeus monodon. Os diferentes PAM foram testados contra bactérias marinhas do gênero Vibrio, leveduras e fungos filamentosos, de interesse médico e para aqüicultura. Para tanto, estes microrganismos foram incubados em microplacas (96 poços) com diluições seriadas dos diferentes PAM e o crescimento microbiano foi monitorado através de densidade óptica (630nm) e/ou ensaio colorimétrico (INT) no caso de bactérias, determinando-se a concentração mínima inibitória (MIC) e bactericida (MBC) para cada peptídeo. A Mag, Mit, e principalmente a Taq e o ALF (MIC < 1.5 M) apresentaram uma evidente atividade anti-víbrio. Quanto à atividade antifúngica, a Mag e a Taq foram ativas contra a maioria dos fungos testados (com exceção do dermatófito Microsporum canis), enquanto a Clav e Pen não tiveram efeito contra nenhuma espécie avaliada. A Mit e o ALF foram ativos contra fungos do gênero Fusarium de importância para aqüicultura. De modo geral, os PAM investigados neste estudo mostraram uma tendência de diminuir ou perder sua atividade em altas salinidades (> 250mM NaCl), sendo a Taq e a Mit os peptídeos mais estáveis nas diferentes concentrações de NaCl testadas. Curiosamente, todos os PAM utilizados neste estudo perderam sua atividade em presença de água do mar. A atividade antiparasitária dos diferentes PAM foi avaliada contra formas promastigota de Leishmania braziliensis e epi e tripomastigota (infectiva para mamíferos) de Trypanosoma cruzi. Os parasitos foram incubados com diluições seriadas dos diferentes PAM por períodos de 5 a 7h (atividade parasiticida) e de 24 e 72h (atividade antiproliferativa), utilizando um ensaio colorimétrico de viabilidade celular (MTT). A Taq mostrou-se o peptídeo mais potente, inibindo em 100% o crescimento de L. braziliensis e de formas tripomastigota de T. cruzi a partir de 12,5 M. A Pen e a Clav foram ativas somente contra formas tripomastigota de T. cruzi, e a Mit contra L. braziliensis, porém apenas em altas concentrações (100 M). Dos PAM investigados, a Taq e a Mag apresentaram a maior atividade hemolítica em altas concentrações (>12,5 M), sendo que os demais causaram baixas taxas de hemólise (