Interação Trypanosoma cruzi-hospedeiro : influência da infecção na via de apresentação de antígenos MHC de classe I

Ao longo da evolução o Trypanosoma cruzi (agente etiológico da doença de Chagas) desenvolveu estratégias bastante eficientes para evadir-se do sistema imune de seu hospedeiro mamífero. Como consequência, a infecção por este organismo tende a ser crônica, sugerindo que o T. cruzi escapa da vigilância do sistema imune por meio da regulação negativa das vias de processamento de antígenos. Na via de apresentação de antígenos intracelulares MHC de classe I, a grande maioria dos peptídeos antigênicos é gerada pelo proteassoma, um complexo proteico multicatalítico responsável pela degradação de proteínas. Entretanto, sob estimulação com interferon-γ (IFN-γ), as subunidades catalíticas β1, β2 e β5 do proteassoma constitutivo são substituídas pelas subunidades β1i/LMP2, β2i/MECL-1 e β5i/LMP7, formando o imunoproteassoma. O imunoproteassoma tem a sua atividade proteolítica modificada e especializada na geração de peptídeos apresentados pelas moléculas de MHC de classe I. Nesse cenário, nós avaliamos se a expressão e a atividade do proteassoma constitutivo, do imunoproteassoma e também de outros componentes da via de MHC classe I são alteradas pela infecção com T. cruzi em linhagem de célula não imune. Em análises por RT-PCR e géis bidimensionais, foi demonstrado que a expressão e a composição do proteassoma constitutivo não são afetadas pelo parasita. Em contraste, nós mostramos que a biossíntese das subunidades do imunoproteassoma β1i, β2i, β5i, de PA28β, de TAP1 e da molécula de MHC de classe I foi inibida em culturas de células infectadas e tratadas com IFN-γ. Nessas culturas, as atividades proteolíticas do proteassoma também foram drasticamente reduzidas. Em experimentos de citometria de fluxo e microscopia de fluorescência, nós constatamos que a infecção com T. cruzi reduz a densidade de moléculas de MHC de classe I na superfície da célula hospedeira. Tomados em conjunto, os nossos resultados sugerem que o protozoário Trypanosoma cruzi é capaz de modular especificamente a sua infecção por meio de um mecanismo pós-transcricional que inibe a expressão dos componentes da via de MHC de classe I. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACTOver the course of evolution, Trypanosoma cruzi (etiologic agent of Chagas disease) developed efficient strategies to evade the immune system of your mammal host. As consequence, the infection by this parasite tends to be chronic, suggesting that T. cruzi escapes the immune surveillance by down regulating the antigen processing routes. Within the antigen presentation pathway of MHC class I, the majority of intracellular antigenic peptides are generated by the proteasome, a multicatalytic complex responsible for protein degradation. However, upon IFN-γ stimulation, the catalytic constitutive subunits of the proteasome are replaced by the subunits β1i/LMP2, β2i/MECL-1 and β5i/LMP7 to form the immunoproteasome. The immunoproteasome has its protease activity modified promoting the generation of suitable peptides to be presented on MHC class I molecule. In this scenario, we analyzed whether the expression and activity of the constitutive and the immunoproteasome as well as other components of the MHC class I pathway are altered during the infection of non-immune cells with T. cruzi. By RT-PCR and two-dimensional gel electrophoresis analysis, we showed that the expression and composition of the constitutive proteasome is not affected by the parasite. In contrast, the biosynthesis of the immunoproteasome subunits β1i, β2i, β5i also PA28β, TAP1 and MHC class I molecule was down-regulated in infected-IFN-γ-treated cell cultures. In these cultures, the proteasomal proteolytic activities were also down-regulated. By flow cytometry and immunofluorescence microscopy, we observed that infection with T. cruzi reduces the density of MHC class I molecules on the surface of the host cell. Taken together, our results provide evidence that the protozoan T. cruzi specifically modulates its infection through an unknown posttranscriptional mechanism that inhibits the expression of the MHC class I pathway components