Longer exposure to progesterone associated with gnrh agonist for superovulation and embryo production in sheep

Os programas de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) vêm evoluindo ao longo dos últimos anos, contudo ainda existe uma grande variabilidade na resposta superovulatória e produção embrionária que limita o sucesso desta tecnologia na ovinocultura. Um aumento da qualidade folicular e oocitária associado a uma maior controle do momento das múltiplas ovulações poderia ser benéfico para aumentar o número de embriões produzidos. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da maior exposição à progesterona exógena, durante a superestimulação, associado ou não a adição de agonista de GnRH sobre a resposta superovulatória, produção e qualidade embrionária, usando sêmen congelado. Quarenta e oito fêmeas da raça Santa Inês, foram sincronizadas com a inserção de um implante intravaginal (CIDR). Os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: exposição à progesterona por 14 dias (Controle; n = 14); prolongamento de 12 horas na exposição à progesterona (G12hP4; n = 21); e prolongamento de 12 horas associado a uma aplicação de 25 μg de lecirelina (G12hP4GnRH; n = 13). Para superestimulação, 133 mg de pFSH foram administradas em doses decrescentes em 8 aplicações. A resposta superestimulatória e a quantidade de folículos grandes ainda não ovulados foram avaliadas por ultrassonografia (US), ao final do tratamento com FSH e 12 horas após a segunda inseminação artificial (IA), respectivamente. O estro foi detectado com auxílio de rufiões após a remoção do CIDR, e as inseminações foram realizadas 36 e 48 horas após a retirada do mesmo, usando sêmen congelado (100x106 epz/dose). Cinco dias após a primeira inseminação, o número de corpos lúteos (CL) foi avaliado por laparoscopia e os embriões colhidos por laparotomia pré-púbica. A quantidade de ovelhas em estro e o tempo de início do estro após a remoção do dispositivo de progesterona foi semelhante entre os grupos (P>0,05). Todos os grupos tiveram uma elevada resposta superestimulatória (médias variando de 14,33 a 16,18 folículos ≥ 4 mm) (P>0,05). O número de CL foi elevado em todos os grupos (variação de 11 a 12) (P>0,05). O percentual de fertilização foi maior (P<0,05) no G12hP4GnRH do que no Controle e G12hP4 (77%, 34%, e 41%, respectivamente). O maior tempo de exposição à progesterona reduziu (P<0,05) a proporção de embriões degenerados (Controle = 30%; G12hP4 = 7% e GP12hP4GnRH = 10%). A associação do aumento da exposição à progesterona com administração de GnRH reduziu a degeneração embrionária e aumentou a fertilização dos oócitos, podendo ser adotada nos programas de MOTE. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACTMultiple ovulation and embryo transfer programs (MOET) have been evolving over the past few years, however there is still wide variability in superovulatory response and embryo production which limits this technology success of for the sheep industry. An increase in follicular and oocyte quality associated with a control of multiple ovulations moment could be beneficial to increase the produced embryos number. This study aimed to evaluate the effect of increased the exposure time to exogenous progesterone during overstimulation, with or without the addition of GnRH agonist at superovulatory response. For the experiments of embryo production and to access the quality frozen semen was used. Forty-eight Santa Ines ewes were synchronized with intravaginal insertion of progesterone implant (CIDR). The animals were randomly divided into three groups: exposure to progesterone for 14 days (Control, n = 14); extension of 12 hours progesterone exposure (G12hP4, n = 21); and 12 hours extension associated with an application of 25 μg of Lecirelin (G12hP4GnRH, n = 13). For overstimulation, 133 mg of pFSH in decreasing doses were administered in eight applications. Superstimulatory response and large follicles amount that has not ovulated were evaluated by ultrasonography (US), after the treatment with FSH and 12 hours after the second artificial insemination (AI), respectively. Estrus was detected with the aid of thugs after CIDR removal and inseminations were performed 36 and 48 hours after removal, using frozen semen (100x106 sptz/dose). Five days after the first insemination, the number of corpora lutea (CL) was measured by laparoscopy and the embryos were collected by prepubic laparotomy. The amount of oestrus ewes and time of onset of estrus after device removal of progesterone was similar between groups (P > 0.05). All groups had a high superstimulatory response (averages ranging from 14.33 to 16.18 follicles ≥ 4 mm) (P > 0.05). The number of CL was high in all groups (averages ranging from 11 to 12.00) (P > 0.05). The fertilization rate was significantly higher in the G12hP4GnRH compared to the Control and G12hP4 (77%, 34% and 41%), respectively. The longer exposure to progesterone reduced degenerated embryos proportion (Control = 30%; G12hP4 = 7% and G12hP4GnRH = 10%). The association of increased progesterone exposure time and GnRH administration reduces embryonic degeneration and increased oocytes fertilization rates and it may be adopted at MOET programs