Detection of Erwinia psidii through enrichment in guava leaf extract and double radial immunodiffusion

Uma das principais doenças que afetam a produção de goiaba no Brasil é a seca-dos-ponteiros, causada pela bactéria Erwinia psidii, cuja disseminação é favorecida por mudas contaminadas. O desenvolvimento de métodos diagnósticos mais eficazes poderia reduzir a disseminação da bactéria no país. Considerando a necessidade de se disponibilizar um método eficiente e simples para a detecção de E. psidii em material de propagação, foi objetivo desse trabalho produzir antissoros policlonais específicos contra a bactéria e desenvolver um método de detecção utilizando o enriquecimento da população bacteriana em extrato de folhas de goiabeira seguido de imunodifusão radial dupla. Um antissoro foi produzido contra a estirpe tipo da bactéria IBSBF 435 (ICMP 8426, NCPPB 3555), avaliado quanto à eficiência e especificidade e utilizado na determinação dos limiares de detecção da mesma. O antissoro As15-1 reagiu positivamente com todos as estirpes testadas de E. psidii, não reagindo com estirpes de outros gêneros e espécies de bactérias fitopatogênicas e apresentou reação cruzada com dois isolados não patogênicos da flora da goiabeira. O crescimento da população bacteriana no extrato de folhas foi observado após 12 h de incubação a partir de populações iniciais de 103, 105 e 107 ufc/mL, até 60 h. A partir de 12 h, já foi possível detectar E. psidii por enriquecimento e imunodifusão radial nas amostras com populações iniciais de 107 ufc/mL e a partir de 36 h, detectou-se a bactéria mesmo em amostras com populações iniciais de 103 ufc/mL. Considerando a possibilidade de falsos positivos, é recomendável associar outros métodos diagnósticos ao método aqui proposto. _________________________________________________________________________________ ABSTRACTOne of the most important diseases affecting guava production in Brazil is bacterial blight, caused by the bacterium Erwinia psidii. Pathogen dissemination often occurs through contaminated propagating plant material. The development of more effective diagnostic methods may reduce pathogen dissemination in the country. Considering the need for a reliable and simple method for detecting the pathogen in plant material, the objectives of this study were to produce E. psdii-specific polyclonal antibodies and to develop a detection method using bacterial population enrichment on guava leaf extracts followed by double radial immunodiffusion. The antiserum was produced against the E. psidii type strain IBSBF 435 (ICMP 8426, NCPPB 3555) and its efficiency, specificity and sensitivity threshold were determined. The antiserum As15-1 was tested with strains of several plant-pathogenic bacteria and reacted positively with all strains of E. psidii, although cross reactions were detected with two non-pathogenic isolates from guava flora. Bacterial multiplication on leaf extracts was observed 12 h after incubation from initial populations of 103, 105 and 107 ufc/mL, up to 60 h. After 12 h it was already possible to detect E. psidii in samples with starting populations of 107 cfu/mL. After 36 h, the enrichment technique allowed the detection of E. psidii using double radial immunodiffusion in samples with populations as low as 103 cfu/mL. Considering the possibility of false positives it is desirable to associate other diagnostic methods with the method proposed in this study