Prevalence and genetic variability vancomycin resistant enterococci isolated from poultry raised on non-intensive production farms from Brazil

Enterococos resistentes à vancomicina (ERV) são patógenos emergentes em infecções hospitalares. Essas bactérias também colonizam animais saudáveis, que podem ser considerados reservatórios da bactéria e de genes de resistência. O presente estudo foi o primeiro realizado com objetivo de examinar a presença de ERV em fazendas de frangos caipiras no Brasil. A investigação foi conduzida em propriedades que utilizavam o sistema de produção não intensivo, criando os frangos sem antibióticos ou outros promotores de crescimento. Todas as fazendas localizavam-se no Distrito Federal, na região Centro-Oeste do Brasil. Foi coletado um total de 200 swabs cloacais, de 40 propriedades, amostradas de 8 regiões geográficas diferentes. Os swabs foram inoculados em meio BBL Enterococcosel Broth suplementado com 8 µg/mL de vancomicina. Após incubação, as amostras positivas foram plaqueadas em ágar sangue. Colônias típicas de enterococos, com cocos Gram positivos e catalase negativos foram submetidas à PCR multiplex, para identificação das espécies E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum e E. casseliflavus, e dos genes de resistência à vancomicina, vanA e vanB. No atual estudo não foram isolados enterococos contendo os genes vanA ou vanB. Trinta e sete isolados carrearam o genes de resistência vanC. Desses os genes vanC1 e vanC2/3 foram presentes respectivamente em 26 (13,0%) e 11 (5,5%) isolados. Foi isolado somente um microrganismo da espécie E. faecalis. A análise de variabilidade dos isolados, realizada por eletroforese em gel de campo pulsado, mostrou que as espécies E. casseliflavus e E. gallinarum formam populações microbianas com diferenças em sua estrutura genética, sendo que a última pode formar genogrupos de linhagens geneticamente relacionados. Concluiu-se, então, que frangos caipiras não são reservatórios de enterococos vanA e vanB, e que as espécies E. gallinarum e E. casseliflavus apresentam diferenças de variabilidade genética. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACTVancomycin-resistant enterococci (VRE) are emerging pathogens of hospital- acquired infections. Epidemiological studies found animals, like poultry, as non- human reservoirs of the bacteria and vancomycin resistant genes. Here we present the first surveillance study aimed at examining wheter VRE colonize poultry raised on non intensive farms from Brazil. We selected poultry farms that employ non-intensive production techniques and raise the animals without antibiotic growth promoter. The sampled farms (n=40) were from the Federal District which is located in the central- west geographic region of Brazil. We collected 200 cloacal swabs from eight different regions. The swabs were inoculated in the BBL Enterococcosel Broth supplemented with 8 µg/mL vancomycin. After incubation, the positive samples were plated onto blood-sheep agar plates. Typical enterococcal colonies, were submitted to the multiplex PCR reaction. We used a carefully adjusted combination of primers to identify the enterococcal species E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum e E. casseliflavus, and the vancomycin-resistance genes vanA and vanB. In the present surveillance study, vanA- and vanB-containing enterococci were absent in all the 200 samples studied. Thirty-seven isolates harbored the VanC-type genes. From these, the vanC1 and the vanC2/3 genes were identified, respectively, in 26 (13.0%) and 11 (5.5%) isolates. We found only one E. faecalis isolate. The genetic variability analyses carried by pulsed field gel eletrophoresis, showed differences in the genetic structure of the E. casseliflavus and E. gallinarum microbian populations. In conclusion, we showed that poultry raised in non intensive production farms are not reservoirs of vanA- and vanB-containing enterococci. In addition, we found remarkable differences in the genetic variability between E. gallinarum e E. casseliflavus species