Estudo da metaloproteinases 2 e 9 e seus inibidores nas formas cl??nicas indeterminada e card??aca da doen??a de Chagas

A cardiomiopatia dilatada cr??nica decorrente da infec????o pelo T. cruzi est?? associada com o remodelamento do mioc??rdio e com a fibrose intersticial, o que resulta em mudan??as significativas da matriz extracelular (MEC). O remodelamento da MEC ?? regulado por enzimas proteol??ticas como as metaloproteinases de matriz (MMPs). Nesse estudo, avaliamos pela primeira vez o envolvimento das MMPs 2 e 9 e seus inibidores (TIMPs) em pacientes portadores das formas cl??nicas indeterminada (IND) e card??aca (CARD) da doen??a de Chagas. Nossos resultados mostraram que os n??veis s??ricos da MMP-9 est??o associados com a gravidade do acometimento card??aco e que a MMP-9 possui maior potencial de atividade proteol??tica no soro de pacientes CARD. Os n??veis s??ricos de TIMP-1 n??o apresentaram diferen??as estat??sticas entre os grupos estudados. Por outro lado, os n??veis s??ricos de TIMP-2 foram maiores no grupo CARD. A partir da an??lise de correla????o, foi poss??vel observar uma poss??vel especificidade do TIMP-1 pela MMP-9. A an??lise da produ????o de MMPs por linf??citos T e mon??citos mostrou que essas c??lulas do sistema imune s??o capazes de produzir MMP-2 e MMP-9 e, ainda que linf??citos T CD8+ s??o as principais c??lulas mononucleares produtoras de MMP-2 e MMP-9. A partir da cultura tridimensional de cardiomi??citos de camundongos, observamos que existem componentes no soro dos pacientes com doen??a de Chagas capazes de induzir a express??o de componentes da matriz extracelular no microtecido card??aco. Al??m disso, MMP-2 apresentou correla????o negativa com prote??nas de matriz (laminina e fibronectina) e com citocinas inflamat??rias (TNF-?????????IL-6 e IL-1???), enquanto que a MMP-9 apresentou correla????o positiva com prote??nas de matriz (laminina e fibronectina) e com a citocina inflamat??ria IL-1???. A partir da an??lise da ocorr??ncia de polimorfismos de nucleot??deo ??nico, n??o foi poss??vel observar influ??ncia da gen??tica do hospedeiro sobre os n??veis s??ricos das MMPs 2 e 9 e seus inibidores, bem como sobre a morbidade da doen??a de Chagas. Nossos resultados sugerem que MMP-2 e MMP-9 participam de maneira diferente na patog??nese da doen??a de Chagas, sendo que a MMP-9 parece estar mais envolvida no processo inflamat??rio e no remodelamento card??aco. Em resumo, nossos resultados mostram, pela primeira vez, o envolvimento da MMP-9, mas n??o da MMP-2, na cardiomiopatia chag??sica. Esses dados s??o inovadores e representam um avan??o no conhecimento dos mecanismos envolvidos no estabelecimento e manuten????o da patologia do acometimento card??aco na doen??a de Chagas.Dilated chronic cardiomyopathy (DCC) in Chagas disease is associated with myocardial remodeling and interstitial fibrosis, resulting in significant extracellular matrix (ECM) modifications. ECM remodeling is regulatedby proteolytic enzymes such as matrix metalloproteinases (MMPs). In this study, we evaluated, for the first time, the serum MMPs 2 and 9 levels, as well as their main cell sources in the peripheral blood from patients presenting the indeterminate (IND) or cardiac (CARD) clinical forms of Chagas disease. Our results showed that MMP-9 serum levels are associated with the severity of Chagas disease. The serum levels of TIMP-1 were not different between the studied groups; however the serum levels of TIMP-2 were higher in CARD group.The correlation analysis showed a possible specificity of TIMP-1 for MMP-9. The analysis of MMPs production by T lymphocytes showed that CD8+ T cells are the main source of both MMP-2 and MMP-9 molecules. Using a new 3-dimensional model of fibrosis we also observed that serum from patients with Chagas disease induced an increase in the extracellular matrix components in cardiac spheroids obtained from mice cardiomyocytes. Furthermore, MMP-2 and MMP-9 have showed different profile of correlation with matrixproteins (laminin and fibronectin) and inflammatory cytokines (TNF-???and IL-1???) in patients with Chagas disease. Our results suggest that MMP-2 and MMP-9 show distinct activities in Chagas disease pathogenesis. While MMP-9 seems to be involved with the inflammation and cardiac remodeling of Chagas disease, MMP-2 does not show any correlation with inflammatory molecules. There are many factors involved in the determination of the severity and progression of Chagas disease, and host genetics is certainly a contributing factor for the development of the disease. Therefore, we evaluated whether there were significant polymorphisms in MMPs and TIMPs genes. Our results did not show any association between polymorphisms occurrence and morbidity of the disease. In conclusion, our datastress the involvement of MMP-9, and not of MMP-2, in heart disease and, for the first time, its participation in chagasic cardiomyopathy. These data are innovative and represent an advance in the knowledge of the mechanisms involved in the establishment/maintenance of the Chagas heart disease pathology